Robustart Taq DNK polimeraza
Robustart Taq DNK polimeraza - bu issiq start DNK polimeraza.Ushbu mahsulot nafaqat PCR tizimini tayyorlash va kuchaytirish jarayonida primerlarning o'ziga xos bo'lmagan tavlanishi yoki primer agregatsiyasi natijasida yuzaga keladigan o'ziga xos bo'lmagan reaktsiyani yaxshiroq inhibe qila olmaydi.Shuning uchun u mukammal o'ziga xoslikka ega va past konsentratsiyali shablonlarni kuchaytirish uchun samaraliroqdir va u multiplekslangan PCR kuchaytirish reaktsiyasi uchun javob beradi.Bundan tashqari, ushbu mahsulot juda yaxshi qo'llanilishiga ega va har xil turdagi PCR reaktsiyalarida barqaror kuchaytirish natijalarini olish mumkin.
Komponentlar
1.5 U/mL Robustart Taq DNK polimeraza
2.10 × PCR bufer II (Mg²+ bepul) (ixtiyoriy)
3.25 mM MgCl2(ixtiyoriy)
* 10 × PCR bufer II (Mg²+ bepul) tarkibida dNTP va Mg²+ mavjud emas, iltimos, dNTP va MgCl qoʻshing.2reaksiya tizimini tayyorlashda.
Tavsiya etilgan ilovalar
1.Tez kuchaytirish.
2.Bir nechta kuchaytirish.
3.Qon, tamponlar va boshqa namunalarni bevosita kuchaytirish.
4.Nafas olish organlari kasalliklarini aniqlash.
Saqlash holati
Uzoq muddatli saqlash uchun -20 ° C, ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtirish kerak, tez-tez muzlashdan saqlaning.
*Agar sovutilgandan keyin yog'ingarchilik paydo bo'lsa, bu normal holat;aralashtirish va ishlatishdan oldin xona haroratiga tenglashtirish tavsiya etiladi.
Birlik ta'rifi
Bitta faol birlik (U) 10 nmol deoksiribonukleotidni kislotada erimaydigan moddaga 74°C da 30 daqiqa davomida faollashtirilgan losos sperma DNKsidan shablon/primer sifatida kiritadigan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
1.SDS-PAGE elektroforetik tozaligi 98% dan yuqori.
2.Kuchaytirish sezgirligi, partiyadan partiyaga nazorat qilish, barqarorlik.
3.Ekzogen nukleaza faolligi yo'q, ekzogen endonukleaz yoki ekzonukleaz bilan ifloslanish yo'q
Ko'rsatmalar
Reaktsiyani sozlash
| Komponentlar | Ovoz (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| 10 × PCR bufer II (Mg²+ bepul)a | 5 | 1× |
| dNTP (har bir dNTP 10 mM) | 1 | 200 mkM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNK polimeraza (5U/mkl) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Primer aralashmasib | 2 | 1× |
| Shablon | - | ＜ 1 mkg/reaksiya |
| ddH2O | 50 gacha | - |
Eslatmalar:
1) a.Buferda dNTP va Mg²+ mavjud emas, iltimos, dNTP va MgCl qo'shing2reaksiya tizimini tayyorlashda.
2) b.Agar qPCR/qRT-PCR uchun ishlatilsa, reaksiya tizimiga lyuminestsent problar qo'shilishi kerak.Odatda, 0,2 mkM yakuniy primer konsentratsiyasi yaxshi natijalar beradi;reaksiya ko'rsatkichi yomon bo'lsa, primer konsentratsiyasini 0,2-1 mkM oralig'ida sozlash mumkin.Prob konsentratsiyasi odatda 0,1-0,3 mkM oralig'ida optimallashtiriladi.Primer va zondning eng yaxshi kombinatsiyasini topish uchun kontsentratsiya gradienti tajribalarini o'tkazish mumkin.
Termal aylanish protokoli
| Doimiy PCRjarayon | |||
| Qadam | Harorat | Vaqt | Velosipedlar |
| Oldindan denaturatsiya | 95℃ | 1-5 daqiqa | 1 |
| Denaturatsiya | 95℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Yuvish / kengaytirish | 56-64 ℃ | 20-60 sek | |
| Tez PCRjarayon | |||
| Qadam | Harorat | Vaqt | Velosipedlar |
| Oldindan denaturatsiya | 95℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturatsiya | 95℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Yuvish / kengaytirish | 56-64 ℃ | 5-20 sek | |
Eslatmalar
1.Tez DNK polimerazasini kuchaytirish tezligi 1 kb/10 s dan kam bo'lmasligi kerak.Turli xil PCR asboblarining harorat ko'tarilishi va tushishi tezligi, haroratni nazorat qilish rejimi va issiqlik o'tkazuvchanligi samaradorligi juda katta farq qiladi, shuning uchun maxsus tezkor PCR asbobi uchun optimal reaktsiya sharoitlarini optimallashtirish tavsiya etiladi.
2.Tizim yuqori darajada moslashuvchan, yuqori o'ziga xoslik va sezgirlik bilan.
3.Yuqori sezgirlikdagi PCRni aniqlash reagentlari sifatida foydalanish uchun javob beradi va multipleks PCR kuchaytirish reaktsiyalarida foydalanish mumkin.
4.5′→3′ polimeraza faolligi, 5′→3′ eksonukleaza faolligi;3'→5' eksonukleaza faolligi yo'q;tuzatish funktsiyasi yo'q.
5.PCR va RT-PCR ning sifat va miqdoriy sinovlari uchun javob beradi.
6.PCR mahsulotining 3' uchi A bo'lib, uni bevosita T vektoriga klonlash mumkin.
7.Uch bosqichli usul past haroratga ega bo'lgan primerlar uchun yoki 200 bp dan uzunroq bo'laklarni kuchaytirish uchun tavsiya etiladi.
