Haroratga sezgir UNG
Temperatura Sensitive UNG (TS-UNG) E. coli da rekombinant ifoda orqali olinadi.Ferment urasil o'z ichiga olgan bir va ikki zanjirli DNKdan erkin urasilning ajralib chiqishini katalizlaydi va RNKga nisbatan faol emas.E. coli genining an'anaviy UNG fermenti bilan solishtirganda, TS-UNG fermenti past haroratlarda (20 ℃ ~ 37 ℃) yuqori faollikka ega va haroratga sezgir va osongina inaktivlanadi (50 ℃), dUTP o'z ichiga olgan kuchaytirgichning buzilishidan qochadi. mahsulotlar xona haroratida an'anaviy UNG fermenti inaktivatsiyasidan keyin qolishi mumkin bo'lgan qoldiq faollik bilan.Shuning uchun TS-UNG fermenti nafaqat PCR kontaminatsiyasini oldini olish reaktsiyasi uchun mos keladi, balki RT-PCR kuchaytirish dasturi bilan yaxshi mos keladi va RT-PCR ifloslanishining oldini olish reaktsiyasida ishlatilishi mumkin.
Tavsiya etilgan ilova
Kontaminatsiyani oldini olish kuchaytirilishi
Saqlash holati
Uzoq muddatli saqlash uchun -20 ° C, ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtirish kerak, tez-tez muzlashdan saqlaning.
Saqlash buferi
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizator, 50% glitserin.
Birlik ta'rifi
Tarkibida dU asoslari boʻlgan 1 mkg bitta zanjirli DNKni 37°C da 1 soatda parchalash uchun zarur boʻlgan ferment miqdori 1 birlik faollik (U) ni tashkil qiladi.
Sifat nazorati
1.SDS-PAGE elektroforetik tozaligi 98% dan yuqori
2.Degradatsiya faoliyati, partiyadan partiyaga nazorat, barqarorlik
3.Ekzogen nukleaza faolligi yo'q, ekzogen endonukleaza yoki ekzonukleaza bilan ifloslanish yo'q.
Ko'rsatmalar
| Komponentlar | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| 10 × PCR buferi (dNTPsiz, Mg²+ozod) | 5 | 1× |
| dUTPlar (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 mkM |
| dUTP (dTTP o'rniga) | - | 200-600 mkM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 mkl | 1-4 mM |
| 5 U/mL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/mkLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer aralashmasia | 2 | 1× |
| Shablon | - | ＜1mkg/reaksiya |
| ddH₂O | 50 gacha | - |
Eslatma: a: Agar qPCR/qRT-PCR uchun ishlatilsa, lyuminestsent prob reaksiya tizimiga qo'shilishi kerak.Odatda, 0,2 mkM yakuniy primer konsentratsiyasi yaxshi natijalar berishi mumkin;reaksiya ko'rsatkichi yomon bo'lsa, primer konsentratsiyasini 0,2-1 mkM oralig'ida sozlash mumkin.Odatda, zond konsentratsiyasi 0,1-0,3 mkM oralig'ida optimallashtiriladi.Primer va zondning eng yaxshi kombinatsiyasini topish uchun kontsentratsiya gradienti tajribalarini o'tkazish mumkin.
Eslatmalar
1.TS-UNG fermentining optimal reaktsiya harorati nisbatan past va uni 20 ℃ ~ 37 ℃ oralig'ida optimallashtirish mumkin, fermentning dozasi va reaktsiya vaqti 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ oralig'ida optimallashtirilishi mumkin. 10 min;va ferment teskari transkripsiya jarayonida faolsizlanishi mumkin.
2.Kontaminatsiyani oldini olish uchun PCR va RT-PCR uchun javob beradi.
3.Tez-tez muzlashdan saqlaning va haroratning katta o'zgarishiga ta'sir qilmang.
4.Kuchaytirilishi kerak bo'lgan turli genlar dUTP dan foydalanish samaradorligi va UNG fermentiga sezgirligiga ega, shuning uchun agar UNG tizimidan foydalanish aniqlash sezgirligining pasayishiga olib keladigan bo'lsa, reaktsiya tizimini sozlash va optimallashtirish kerak, agar sizga texnik yordam kerak bo'lsa, iltimos, murojaat qiling. bizning kompaniyamiz.
