Virusli DNK/RNK ekstraktsiyasi to'plami
Ushbu to'plam nazofarengeal tamponlar, atrof-muhit tamponlari, hujayra madaniyati supernatantlari va to'qimalar gomogenati supernatantlari kabi namunalardan yuqori tozalikdagi virusli DNK/RNKni tez olish uchun javob beradi.To'plam silika membranasini tozalash texnologiyasiga asoslangan bo'lib, yuqori sifatli virusli DNK/RNKni ajratib olish uchun fenol/xloroform organik erituvchilar yoki ko'p vaqt talab qiluvchi spirt cho'kmasidan foydalanish zaruratini yo'q qiladi.Olingan nuklein kislotalar nopokliksiz va teskari transkripsiya, PCR, RT-PCR, real vaqtda PCR, keyingi avlod sekvensiyasi (NGS) va Northern blot kabi quyi oqim tajribalarida foydalanishga tayyor.
Saqlash shartlari
15 ~ 25 ℃ haroratda saqlang va xona haroratida tashish
Komponentlar
| Komponentlar | 100RXNS |
| Bufer VL | 50 ml |
| Bufer RW | 120 ml |
| RNazsiz ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNK ustunlari | 100 |
| Yig'ish naychalari (2ml) | 100 |
| RNazsiz yig'ish naychalari (1 ,5 ml) | 100 |
Bufer VL:Lizis va bog'lanish uchun muhitni ta'minlang.
Bufer RW:Qoldiq oqsillarni va boshqa aralashmalarni olib tashlang.
RNazsiz ddH2O:Spin ustunidagi membranadan DNK/RNKni elutsiya qiling.
FastPure RNK ustunlari:Xususan, DNK/RNKni adsorbsiyalash.
Yig'ish naychalari 2 ml:Filtrni yig'ing.
RNazsiz yig'ish naychalari 1,5 ml:DNK/RNK yig'ing.
Ilovalar
Nazofarengeal tamponlar, atrof-muhit tamponlari, hujayra madaniyati supernatantlari va to'qimalarning gomogenati supernatantlari.
O'z-o'zidan tayyorlangan Materials
RNazsiz pipetka uchlari, 1,5 ml RNazsiz sentrifuga naychalari, santrifuga, vorteksli mikser va pipetkalar.
Tajriba jarayoni
Quyidagi barcha amallarni bioxavfsizlik kabinetida bajaring.
1. RNazsiz sentrifuga trubasiga 200 mkl namuna qo‘shing (namuna yetarli bo‘lmasa PBS yoki 0,9% NaCl qo‘shing), 500 mkl Buffer VL qo‘shing, 15 – 30 soniya davomida vorteks qilib yaxshilab aralashtiring va sentrifugalang. trubaning pastki qismidagi aralashmani yig'ish uchun qisqacha.
2. FastPure RNK ustunlarini yig'ish naychalariga 2 ml joylashtiring.Aralashmani 1-bosqichdan FastPure RNK ustunlariga o'tkazing, 12000 rpm (13,400 × g) da 1 daqiqa davomida santrifüj qiling va filtratni tashlang.
3. FastPure RNK ustunlariga 600 mkl Bufer RW qo'shing, 12 000 rpm (13 400 × g) da 30 soniya davomida santrifüj qiling va filtratni tashlang.
4. 3-bosqichni takrorlang.
5. Bo'sh ustunni 12 000 rpm (13 400 × g) da 2 daqiqa davomida santrifüj qiling.
6. Ehtiyotkorlik bilan FastPure RNK ustunlarini yangi RNazsiz yig'ish naychalariga 1,5 ml (to'plamda taqdim etilgan) o'tkazing va ustunga tegmasdan membrananing o'rtasiga 30-50 mkl RNazsiz ddH2O qo'shing.Xona haroratida 1 daqiqa turishga ruxsat bering va 12000 rpm (13,400 × g) da 1 daqiqa davomida santrifüj qiling.
7. FastPure RNK ustunlarini tashlang.DNK/RNK to'g'ridan-to'g'ri keyingi tahlillar uchun ishlatilishi mumkin yoki -30 ~ -15 ° C da qisqa muddatga yoki -85 ~ -65 ° C da uzoqroq muddatga saqlanishi mumkin.
Eslatmalar
Faqat tadqiqot uchun.Diagnostika muolajalarida foydalanish uchun emas.
1. Namunalarni oldindan xona haroratiga tenglashtiring.
2. Viruslar juda yuqumli.Iltimos, tajribadan oldin barcha zarur xavfsizlik choralari ko'rilganligiga ishonch hosil qiling.
3. Namunani qayta-qayta muzlatish va eritishdan saqlaning, chunki bu ekstraksiya qilingan virusli DNK/RNKning degradatsiyasiga yoki unumdorligining pasayishiga olib kelishi mumkin.
4. O'z-o'zidan tayyorlangan asbob-uskunalar RNazsiz pipetka uchlari, 1,5 ml RNazsiz santrifüj naychalari, sentrifuga, vorteks aralashtirgich va pipetkalarni o'z ichiga oladi.
5. To'plamdan foydalanganda laboratoriya xalati, bir martalik lateks qo'lqop va bir marta ishlatiladigan niqob taqing va RNase bilan ifloslanish xavfini minimallashtirish uchun RNasesiz sarf materiallaridan foydalaning.
6. Agar boshqacha ko'rsatilmagan bo'lsa, barcha amallarni xona haroratida bajaring.
Mexanizm va ish jarayoni
