Bst 2.0 DNK polimeraza (glitserinsiz)
Bst DNK polimeraza V2 Bacillus stearothermophilus DNK polimeraza I dan olingan bo'lib, u 5'→3' DNK polimeraza faolligi va kuchli zanjir almashtirish faolligiga ega, ammo 5'→3' ekzonukleaza faolligi yo'q.Bst DNK Polimeraza V2 ipni siljitish, izotermik kuchaytirish LAMP (Loop mediated isothermal amplification) va tez ketma-ketlik uchun juda mos keladi.
Komponentlar
| Komponent | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraza V2 (Glitserinsiz) (8U/mkl) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 bufer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Ilovalar
1.LAMP izotermik kuchaytirish
2.DNK zanjirining yagona joy almashish reaksiyasi
3.Yuqori GC geni sekvensiyasi
4.Nanogramma darajasining DNK ketma-ketligi.
Saqlash holati
0 ° C ostida tashish va -25 ° C ~ -15 ° C haroratda saqlanadi.
Birlik ta'rifi
Bitta birlik 65°C da 30 daqiqada kislotada erimaydigan moddaga 25 nmol dNTP ni birlashtirgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
1.Protein tozaligi tahlili (SDS-PAGE):Bst DNK polimeraza V2 ning tozaligi Coomassie Blue aniqlash yordamida SDS-PAGE tahlili orqali ≥99% ni tashkil qiladi.
2.Eksonukleaza faoliyati:Minimal 8 U Bst DNK polimeraza V2 va 1 mkg l -Hind Ⅲ hazm bo'ladigan DNKni o'z ichiga olgan 50 mkl reaktsiyani 37 ℃ da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
3.Nikase faoliyati:Minimal 8 U Bst DNK polimeraza V2 ni 1 mkg pBR322 DNK bilan o‘z ichiga olgan 50 mkl reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
4.RNaz faolligi:Kamida 8 U Bst DNK polimeraza V2 va 1,6 mkg MS2 RNK bilan 50 mkL reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
5.E. coli DNKsi:120 U Bst DNK polimeraza V2 E. coli 16S rRNK lokusuga xos primerlar bilan TaqMan qPCR yordamida E. coli genomik DNKsi mavjudligi uchun tekshiriladi.E. coli genomik DNK ifloslanishi ≤1 nusxa.
LAMP reaktsiyasi
| Komponentlar | 25mL |
| 10×HC Bst V2 bufer | 2,5 mkl |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 mkl |
| dNTPs (har biri 10 mM) | 3,5 mkl |
| SYTO™ 16 Yashil (25×)a | 1,0 mkl |
| Primer aralashmasib | 6 mkl |
| Bst DNK polimeraza V2 (glitserinsiz) (8 U/uL) | 1 mkl |
| Shablon | × mL |
| ddH₂O | 25 mL gacha |
Eslatmalar:
1) a.SYTOTM 16 Yashil (25 ×): Eksperimental ehtiyojlarga ko'ra, boshqa bo'yoqlardan o'rinbosar sifatida foydalanish mumkin;
2) b.Primer aralashmasi: 20 μ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB va boshqa hajmlarni aralashtirish orqali olinadi.
Reaktsiya va holat
1 × HC Bst V2 Bufer, inkubatsiya harorati 60°C va 65°C orasida.
Issiqlik inaktivatsiyasi
80 °C, 20 daqiqa
