Namuna chiqarish reaktivi
Namuna chiqarish reagenti molekulyar POCT diagnostika stsenariylari uchun.To'g'ridan-to'g'ri kuchaytirish LAMP va PCR to'g'ridan-to'g'ri kuchaytirishning ikkita tizimi uchun nuklein kislota ekstraktsiyasiga ehtiyoj yo'q.Namuna qo'pol lizatini to'g'ridan-to'g'ri kuchaytirish mumkin, maqsadli genni aniq aniqlash mumkin, namunani aniqlash vaqti yanada qisqartirilishi mumkin, bu molekulyar POCT ning qo'llanilishi talablariga to'liq mos keladi.Burun, tomoq va boshqa namunalar uchun mos keladi.Qayta ishlangan namunalar to'g'ridan-to'g'ri real vaqtda floresan miqdoriy PCR yoki LAMP aniqlash uchun ishlatilishi mumkin va an'anaviy ekstraksiya usullari bilan bir xil natijalarga murakkab nuklein kislota ekstraktsiyasisiz erishish mumkin.
Saqlash shartlari
Tashish va xona haroratida saqlash.
Sifat nazorati
Funktsional aniqlash - miqdoriy qPCR: 800 mkl namunani chiqarish reagenti tizimi kuchaytirildi
1000 nusxada Novel Pseudovirus, bitta burun tampon namunasi, natijada shunga o'xshash kuchaytirish egri chiziqlari vaDCt qiymatlari ± 0,5 Ct ichida.
Eksperimental jarayonres
1. 800 mkl Namuna chiqarish reagentini oling va lizis eritmasini 1,5 ml namuna olish trubasiga yoying.
2. Tampon bilan burun yoki tomoq tamponini oling;Burundan tampon namunasini olish tartibi: steril tamponni oling va uni burun teshigiga soling, asta-sekin taxminan 1,5 sm chuqurlikka o'tkazing, burun shilliq qavatiga nisbatan 15 soniyadan ko'proq vaqt davomida 4 marta muloyimlik bilan aylantiring. , keyin bir xil tampon bilan boshqa burun bo'shlig'ida xuddi shu operatsiyani takrorlang. Tomoq yo'laklaridan namuna olish tartibi: steril tamponni oling va muloyimlik bilan, tezda faringeal bodomsimon bezlarni va orqa faringeal devorni 3 marta artib oling.
3.Tamponni darhol namuna olish trubasiga joylashtiring.Namunaning namuna olish trubkasida to'liq elutsiya qilinishini ta'minlash uchun tampon boshini aylantirish va saqlash eritmasida kamida 30 soniya davomida aralashtirish kerak.
4. Xona haroratida (20 ~ 25 ℃) 1 daqiqa davomida inkubatsiya, lizis buferini tayyorlash tugallanadi.
5. 25 mkl tizimli RT-PCR va RT-LAMP ham aniqlash tajribalari uchun 10 mkl miqdoridagi shablon qo'shilishi bilan mos edi.
Eslatmalar
1. Bitta tamponga mos keladigan to'g'ridan-to'g'ri namunali lizatning minimal miqdori 400 mkl ga sozlanishi mumkin, bu sinov ehtiyojlariga muvofiq sozlanishi.
2. Namuna reagent tomonidan qayta ishlangan namunadan so'ng, testning keyingi bosqichini imkon qadar tezroq o'tkazish tavsiya etiladi, intervalni kutish vaqti 1 soatdan kam bo'lsa.
3. Namuna lizatining pH darajasi kislotali bo'lib, aniqlash tizimi ma'lum bir tamponga ega bo'lishi kerak.Bu pH buferi bilan ko'pgina PCR, RT-PCR va LAMP floresansini aniqlash uchun javob beradi, ammo bufersiz LAMP kolorimetrik aniqlash uchun mos emas.
