DNaz I
DNaz I (Deoksiribonukleaza I) bir yoki ikki zanjirli DNKni hazm qila oladigan endodeoksiribonukleazadir.U 5'-terminalda fosfat guruhlari va 3'-terminalda gidroksil bo'lgan monodeoksinukleotidlar yoki bir yoki ikki zanjirli oligodeoksinukleotidlarni hosil qilish uchun fosfodiester bog'larini taniydi va ajratadi.DNase I ning faolligi Ca2+ ga bog'liq va Mn2+ va Zn2+ kabi ikki valentli metall ionlari tomonidan faollashtirilishi mumkin.5mM Ca2+ fermentni gidrolizdan himoya qiladi.Mg2+ mavjud bo'lganda, ferment tasodifiy DNKning istalgan zanjiridagi istalgan joyni tanib olishi va parchalashi mumkin edi.Mn2+ borligida DNKning qoʻsh iplari bir vaqtning oʻzida tanib olinishi va deyarli bir joyda boʻlinib, tekis uchli DNK boʻlaklarini yoki 1-2 nukleotid chiqib turgan yopishqoq uchli DNK boʻlaklarini hosil qilishi mumkin.
Mahsulot mulki
Qoramol oshqozon osti bezi DNase I xamirturush ifoda tizimida ifodalangan va tozalangan.
Cmuxoliflar
| Komponent | Ovoz balandligi | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaz I, RNazsiz | 20 mkl | 200 mkl | 1 ml | 10 ml |
| 10 × DNase I buferi | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Tashish va saqlash
1. Saqlash barqarorligi: - saqlash uchun 15 ℃ ~ -25 ℃;
2.Transport barqarorligi: Muz paketlari ostida tashish;
3. Taqdim etilgan: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glitserin, 25℃ da pH 7,6.
Birlik ta'rifi
Bitta birlik 37°C da 10 daqiqada 1 mkg pBR322 DNK ni butunlay parchalaydigan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
RNase:37 ℃ da 4 soat davomida 1,6 mkg MS2 RNK bilan 5U DNase I agaroz gel elektroforezi bilan aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
Bakterial Endotoksin:LAL-test, Xitoy Farmakopeyasi IV 2020 nashriga ko'ra, jel chegarasi sinov usuli, umumiy qoida (1143).Bakterial endotoksin miqdori ≤10 EU/mg bo'lishi kerak.
Foydalanish bo'yicha ko'rsatmalar
1. Reaksiya eritmasini RNazsiz trubkada quyida keltirilgan nisbatlarga muvofiq tayyorlang:
| Komponent | Ovoz balandligi |
| RNK | X mkg |
| 10 × DNase I buferi | 1 mkl |
| DNase I, RNazsiz (5U/mkl) | mkg RNK uchun 1 U |
| ddH2O | 10 mL gacha |
15 daqiqa davomida 2,37 ℃;
3. Reaksiyani to‘xtatish uchun tugatish tamponini qo‘shing va DNase I inaktivatsiyasi uchun 10 daqiqa davomida 65 ℃ da qizdiring. Namuna keyingi transkripsiya tajribasi uchun bevosita ishlatilishi mumkin.
Eslatmalar
1.RNK uchun 1U DNase I yoki 1mkg dan kam RNK uchun 1U DNase I dan foydalaning.
2.EDTA 5 mM yakuniy kontsentratsiyasiga qo'shilishi kerak, bu RNKni ferment inaktivatsiyasi paytida parchalanishdan himoya qiladi.
