mag'rur
Mahsulotlar
Dnase assay to'plami (Fluoressensiya) HCP0034A Tavsiya etilgan rasm
  • Dnase tahlil to'plami (Fluoresans) HCP0034A

Dnase tahlil to'plami (Fluoresans)


Mushuk raqami: HCP0034A

Paket: 48T/96T

DNase aniqlash to'plami florofor bilan yorliqli DNK probiga asoslangan.

Mahsulot tavsifi

Mahsulot ma'lumotlari

DNase aniqlash to'plami florofor bilan yorliqli DNK probiga asoslangan.Namuna DNase faolligini o'z ichiga olmasa, prob barqaror va floresan signal ishlab chiqarmaydi;namuna DNase faolligini o'z ichiga olgan bo'lsa, zond degradatsiyaga uchraydi, bu esa asta-sekin kuchaytirilgan floresan signaliga olib keladi;lyuminestsent signalning o'sish tezligi fermentlarning soni va faolligi bilan ijobiy bog'liqdir.Namuna DNase bilan ifloslanganligini aniqlash uchun ex/em=485/525nm to'lqin uzunligida o'lchash uchun floresan mikroplata o'quvchidan foydalaning.


  • Oldingi:
  • Keyingisi:

  • Ilova

    Ushbu to'plam namunalarda DNase kontaminatsiyasini aniqlash uchun ishlatiladi.

     

    Cmuxoliflar

    Ism

    HCP0034A-01

    (192T)

    HCP0034A-02

    (48T)

    10 × reaksiya eritmasi

    2,0 ml

    0,5 ml

    DNK probi

    1 quvur

    1 quvur

    TE buferi

    2,0 ml

    0,5 ml

    DNase I standarti (2U/mkl)

    20 mkl

    10 mkl

    Standart suyultirish buferi

    12 ml

    6 ml

    DNase&RNazsiz suv

    25 ml

    25 ml

    DNaz RNaz uzoqda

    50 ml

    50 ml

     

    Saqlash va barqarorlik

    1.-25 ~ – 15 ℃ da tashiladi;

    2.To'plamning turli komponentlari haroratga qarab alohida saqlanadi:

    Ism

    harorat

    10 × reaksiya eritmasi

    -25 ~ – 15℃

    DNK probi

    -25 ~ – 15℃

    TE buferi

    -25 ~ – 15℃

    DNase I standarti (2U/mkl)

    -25 ~ – 15℃

    Standart suyultirish buferi

    -25 ~ – 15℃

    DNase&RNazsiz suv

    -25 ~ 30 ℃

    DNaz RNaz uzoqda

    2 ~ 30 ℃

    1. Ochilmagan to'plamni 12 oy davomida saqlang.

    2.To'plamni ochgandan keyin 6 oy davomida saqlang.Yorug'lik va qayta-qayta muzlash va eritishning oldini olish uchun DNK probi eritmasini bir martalik foydalanish miqdoriga qarab ajratish tavsiya etiladi.

     

    Kerakli uskunalar va sarf materiallari

    1.Floresan mikroplatasini o'quvchi (shu jumladan ex/em=485/525nm to'lqin uzunligi)

    2.DNaz va RNazsiz pipetkalar va uchlari

    3.DNaz va RNazsiz EP trubkasi

    4.DNase&RNasesiz qora shaffof bo'lmagan 96-quduqli plastinka

    Reaktiv tayyorlash

    1.To'plamni chiqarib oling va xona haroratiga (18 ~ 25 ℃) tenglashtiring, 10 × reaksiya eritmasi, TE buferi, standart DNase I (2U/mkl), standart suyultirish buferi kabi komponentlarni silkiting va aralashtiring va keyin darhol santrifüj qiling.(10 soniya davomida 4000 ~ 7000 rpm tezlikda santrifüj qiling).

    2.DNK zondini 4000 ~ 7000 rpm tezlikda 60 soniya davomida santrifüj qiling, uni trubaning pastki qismiga to'plang, trubka qopqog'ini ehtiyotkorlik bilan oching va DNK probini saqlash eritmasi sifatida eritish uchun 40 mkL TE buferini qo'shing, DNK probini saqlash eritmasini ko'rsatmalarga muvofiq ajrating. takroriy muzlash va eritishning oldini olish uchun ularni -25 ~ -15 °C haroratda saqlang.Har safar sinovdan o'tganingizda probni saqlash eritmasini chiqarib oling, uni DNK probi ishlaydigan eritma sifatida TE buferi bilan 50 marta suyultiring (masalan, 12 mkl DNK probiga 490 mkl TE buferini qo'shing).DNK probining qolgan ishchi eritmasini yorug'lik va qayta-qayta muzlash va eritishning oldini olish uchun -25 ~ -15 °C haroratda saqlang.

     

    Aniqlash bosqichlari

    1.Sezuvchanlikni yo'qotish yoki signalning haddan tashqari to'yinganligi xavfini oldini olish uchun birinchi sinovdan oldin tegishli daromadni belgilang.

    1) asbob parametrlari:

    Aniqlashdan oldin plastinkani 10 ~ 15 s chayqatish;

    Qo'zg'alish to'lqin uzunligi lEx=485nm;

    Emissiya to'lqin uzunligi lEm=525nm;

    Avtomatik daromad funktsiyasidan foydalaning;

    Harorat 37℃;

    Yakuniy nuqta rejimi.

    Iloji bo'lsa, daromadni avtomatik o'lchovga o'rnating, muqobil ravishda dastlab o'rtacha daromad sozlamasidan foydalaning.

    Eslatma: turli asboblarni sozlash usuli mos kelmaydi, batafsil ma'lumot uchun asbob yetkazib beruvchiga murojaat qiling.

    2) 96-quduqli plastinkada 2 ta quduqni tanlang, har bir quduqqa 10 mkL DNK zondi ishchi eritmasi va 10 mkl 10 × reaksiya eritmasi qo'shing;

    3) Bir quduqqa 80 mkl DNase va RNase bo'lmagan suv qo'shing va boshqa quduqqa 79 mkl DNase va RNase bo'lmagan suv va 1 mL DNase I standarti (2U/mkl) qo'shing.

    4) Plitani qorong'i joyda 37 ° C haroratda joylashtiring va 30 daqiqadan so'ng uni sinab ko'ring.

    5) Agar o'sish avtomatik o'lchovga o'rnatilsa, daromad qiymati G1 sifatida belgilangan ma'lumotlar faylining asboblar parametrlari satrida ko'rsatiladi.

    6) Dastlab o'rtacha daromad sozlamasidan foydalanganda shuni ta'kidlash kerak: agar yuqori floresan qiymati asbobning yuqori chegarasidan oshsa, daromad qiymatini mos ravishda kamaytirish kerak;agar yuqori floresan qiymati asbobning yuqori chegarasidan ancha past bo'lsa, daromad qiymati mos ravishda oshirilishi kerak;Nihoyat, tegishli daromad qiymati olinadi, G2 sifatida belgilanadi.

     

    2.Asbob parametrlarini o'rnating:

    Aniqlashdan oldin plastinkani 10 ~ 15 s chayqatish;

    Qo'zg'alish to'lqin uzunligi lEx=485nm;

    Emissiya to'lqin uzunligi lEm=525nm;

    Daromad qiymatini 1-bosqichda olingan G1 yoki G2 ga o'rnating;

    Harorat 37℃;

    Agar mikroplata o'quvchi kinetik rejimni qo'llab-quvvatlasa, kinetik aniqlash rejimidan foydalanish tavsiya etiladi, interval 1 dan 1,5 minutgacha, umumiy vaqt esa 30 minut.

     

    3.Namuna tayyorlash

    Tavsiya etilgan namuna hajmi 80 mkl.Agar sinovdan o'tkaziladigan namuna 80 mkl dan kam bo'lsa, DNaz-RNazsiz suv bilan 80 mklgacha suyultiriladi.

    Sinov qilinadigan namunada floroforning lyuminestsensiyasiga ta'sir qiluvchi moddalar bo'lsa (masalan, quyuq eritmalar, yuqori konsentratsiyali yopishqoq moddalar yoki sirt faol moddalar), namunani DNaz va RNazsiz suv bilan suyultirish kerak, lekin suyultirish jarayoni ta'sir qilishini unutmang. sezgirlik.DNaz faolligi ingibitorlarini (masalan, yuqori ionli quvvatli eritmalar, pH<4 yoki pH>9 buferlar, oqsil denaturantlari va boshqalar) o'z ichiga olgan sinovdan o'tadigan namuna uchun o'lchov natijasi namuna eritmasining umumiy ferment faolligi bo'ladi, lekin o'lchov natijasi emas. fermentning individual faolligi.

    DNase I standartini (2U/mkl) standart suyultirish buferi bilan quyidagicha suyultiring:

    Yo'q.

    Tayyorgarlik jarayoni

    Diqqat

    1

    2mL DNase I standarti + 198mL standart suyultirish buferi

    2×10-2U/mkl

    2

    2mL №1 namuna + 198 mkl standart suyultirish buferi

    2×10-4U/mkl

     2-raqamli namunani DNase va RNazsiz suv bilan 10 marta suyultiring:

    3

    20 mkl № 2 namuna + 180 mkl DNase va RNazsiz suv

    2×10-5U/mkl

    3-son namunasi ijobiy nazorat sifatida ishlatiladi;Salbiy nazorat sifatida DNaz va RNazsiz suv ishlatiladi.

    1. Dozalash va sinovdan o'tkazish

    1) 96-quduqli plastinkaga 10 mkl DNK probi ishchi eritmasi va 10 mkl 10 × Reaksiya eritmasi qo'shing.Tegishli ravishda salbiy nazorat va musbat nazoratni qo'shish uchun 4 ta quduqni, sinovdan o'tadigan namunalarni qo'shish uchun esa boshqa quduqlarni tanlang.Har bir namuna uchun 2 ta bir nechta quduq mavjud, har bir quduq uchun 80 mkl;

    2) Darhol 0 daqiqa davomida RFU0 floresan signal qiymatini sinab ko'ring va o'qing.30 daqiqa davomida 37 ℃ haroratda qorong'i joyga qo'yilgandan so'ng, 30 daqiqa davomida RFU30 floresan signal qiymatini sinab ko'ring va yana o'qing.Agar dinamik rejim qabul qilingan bo'lsa, 0 ~ 30 daqiqa davomida barcha floresans signallari o'qilishi mumkin.

     

    Sinov natijalarini talqin qilish

    Agar RFU30≥2×RFU0 bo'lsa, tekshirilayotgan namuna DNase bilan ifloslangan deb hisoblanadi.

    Eslatma: agar sinovdan o'tadigan namuna jiddiy ifloslangan bo'lsa yoki aralashuvchi moddalar bo'lsa, RFU0 (sinov qilinadigan namuna) > RFU0 (ijobiy sifat nazorati) va RFU30 (sifat nazorati) < 2 × RFU0 (namuna tekshirilishi kerak) bo'lishi mumkin. sinovdan o'tgan), noto'g'ri salbiy xulosaga olib keladi.Bu vaqtda sinovdan o'tkaziladigan namuna DNaz va RNazsiz suv bilan oldindan suyultirilishi va keyin sinovdan o'tkazilishi kerak.

     

    Miqdoriy aniqlash

    Sinov qilinadigan namuna ifloslangan bo'lsa va namunadagi DNase kontsentratsiyasi qiymatini baholash kerak bo'lsa, uni quyidagi protseduralar orqali aniqlash mumkin:

    DNase I standartini (2U/mkl) standart suyultirish buferi bilan quyidagicha suyultiring:

    Yo'q.

    Tayyorgarlik jarayoni

    diqqat

    1

    2mL DNase I standarti +198mL standart suyultirish buferi

    2×10-2U/mkl

    2

    2mL №1 namuna +198 mkl standart suyultirish buferi

    2×10-4U/mkl

    3

    100mkL №2 namuna+100mkL standart suyultirish buferi

    1×10-4U/mkl

    4

    100mkL №3 namuna+100mkL standart suyultirish buferi

    5×10-5U/mkl

    5

    100 mkl № 4 namuna + 100 mkl standart suyultirish buferi

    2,5×10-5U/mkl

    6

    100mL №5 namuna+100mkL standart suyultirish buferi

    1,25×10-5U/mkl

    Keyin № 3 ~ 5 namunalarni DNase va RNazsiz suv bilan 10 marta suyultiring:

    7

    20 mkLNo.3 ta namuna+180 mkl DNase&RNazsiz suv

    1×10-5U/mkl

    8

    20 mkLNo.4 ta namuna+180 mkl DNase&RNazsiz suv

    5×10-6U/mkl

    9

    20 mkLNo.5 ta namuna+180 mkl DNase&RNazsiz suv

    2,5×10-6U/mkl

    10

    20 mkLNo.6 ta namuna+180 mkl DNase&RNazsiz suv

    1,25×10-6U/mkl

    № 7 ~ № 10 namunalar standartlar sifatida ishlatiladi;DNase & RNazsiz suv 0-konsentratsiyali namuna sifatida.

    RFU0 va RFU30 ni olish uchun aniqlash bosqichlariga muvofiq 0-konsentratsiyali namunani, standartlarni va ifloslangan namunani birgalikda sinab ko'ring. ∆RFU = RFU30-RFU0 ni hisoblang, ordinata sifatida ∆RFU (0 konsentratsiya) va ∆RFU (standart) ni va DNase I kontsentratsiyasini oling. abscissa sifatida standartning (0 konsentratsiyasi 0 ga teng), chiziqli o'rnatishni amalga oshiring va y = ax + B moslama tenglamasini hisoblang va korrelyatsiya koeffitsienti r ≥ 0,99 bo'lishi kerak.∆RFU (kontaminatsiyalangan namuna) ni y sifatida tenglamaga keltiring, x ni hisoblang va ifloslangan namunaning taxminiy konsentratsiyasi qiymatini olish uchun uni namunani oldindan suyultirish ko'paytmasiga ko'paytiring.

    Eslatma: Asbob signalining tebranishi tufayli ∆RFU<0, bu vaqtda u ∆RFU=0 sifatida hisoblanadi.

     

    Aniqlash samaradorligi

    1. Aniqlash chegarasi: DNase I: 1,25×10-6U/mkl

    2. Aniqlik: partiya ichidagi o'zgarish koeffitsienti ≤ 10%, partiyalararo o'zgarish koeffitsienti ≤ 15%

     

    Diqqat

    1. Namuna qo'shish operatsiyasi imkon qadar tez bo'lishi kerak.Juda uzoq vaqt tajribaning aniqligiga ta'sir qiladi.

    2. Turli lyuminestsent fermentlarni markalash asboblarining parametrlari har xil.Birinchi sinovdan oldin tegishli daromadni o'rnating.

    3. Ishlatishdan oldin barcha reagentlar to'liq chayqalishi kerak.Namunalarni qo'shganda, qo'shilgan namunalar quduq devorining yuqori qismiga qo'shilmasligi uchun ferment yorlig'i plitasining pastki qismiga qo'shilishi kerak.Namunalarni qo'shganda, chayqalmasligi yoki pufakchalar hosil qilmasligiga e'tibor bering.

    4. To'plamdagi standart DNase I bo'lib, uning faol birligi bir birlik DNase I Reaktsiya Buferida 37°C da 10 daqiqada 1 mkg pBR322 DNKni to'liq parchalaydigan ferment miqdori sifatida aniqlanadi. 1].Bitta DNase I birligi 0,3 Kunitz birligiga ekvivalentdir[2].

    5. Ekzogen DNase ifloslanishiga yo'l qo'ymaslik uchun DNase RNase eksperimental stol yuzasiga, qo'lqoplarga va boshqa sirtlarga püskürtülebilir.5 daqiqadan so'ng ularni toza qog'oz sochiq bilan tozalang va keyin keyingi eksperimental operatsiyalarni bajaring.

     

     

    Xabaringizni shu yerga yozing va bizga yuboring