RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ushbu mahsulotda reaksiya buferi, RT-fermentlar aralashmasi (Bst DNK polimeraza va issiqlikka chidamli teskari transkriptaza), liyofillangan himoya vositalari va xromogen bo'yoq komponentlari mavjud.Foydalanish uchun faqat Buferdan foydalaning, reaksiya fermenti va primer aralashtiriladi va shablonga qo'shiladi;liyofilizatsiyalangan himoya vositasini qo'shish to'g'ri bo'lishi mumkin.U liyofilizatorga ulangan va liyofilizatsiya qilingan va foydalanilganda faqat primerlar va shablonlar qo'shilgan.Ushbu to'plam kuchaytirishni tez, aniq vizual aniqlashni ta'minlaydi, bu salbiy reaktsiya qizil rangda, ijobiy reaktsiya sariq rangga o'zgarishi bilan ko'rsatiladi.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop vositali kuchaytiruvchi bufer (bo'yoq bilan) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-fermentlar aralashmasi | 270 mkl | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Liyofilizatsiyalangan himoya vositasi | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Ilovalar
DNK yoki RNK izotermik kuchaytirish uchun.
Saqlash shartlari
Quruq muz bilan tashiladi, -25 ~ -15 ℃ da saqlanadi.Tez-tez muzlashdan saqlaning, mahsulot 12 oy davomida amal qiladi.
Protokol
1.Xona haroratida ishlatiladigan reaksiya tamponini eritib oling.Yaxshilab aralashtirish uchun naychalarni qisqa vaqt ichida aylantiring yoki bir necha marta aylantiring, so'ngra suyuqlikni naychaning tubiga to'plash uchun santrifüj qiling.
2.Reaksiya tizimini tayyorlash.Ushbu reagent ikkita reaksiya tizimida, suyuq reaktsiya aralashmasi va liyofillangan tizim aralashmasida tayyorlanishi mumkin.
1) Suyuq reaksiya aralashmasini tayyorlang
| Komponent | Ovoz balandligi |
| Loop vositali kuchaytiruvchi bufer (bo'yoq bilan) | 10 mkl |
| RT-fermentlar aralashmasi | 2,8 mkl |
| 10 × Primer aralashmasia | 5 mkl |
| Shablonlar DNK/RNK b | × mL |
| Nukleazsiz suv | 50 mL gacha |
2) Liyofilizatsiya tizimi aralashmasi
① Liyofillangan aralashmani tayyorlang
| Komponent | Ovoz balandligi |
| Loop vositali kuchaytiruvchi bufer (bo'yoq bilan) | 10 mkl |
| Liyofilizatsiyalangan himoya vositasi | 20 mkl |
| RT-fermentlar aralashmasi | 2,8 mkl |
| Nukleazsiz suv | 50 mL gacha |
② Liyofilizatsiya: Tayyorlangan aralash 50 mkl tizimda liyofilizatsiya qilindi
③ Reaksiya aralashmasini tayyorlang
| Komponent | Ovoz balandligi |
| Liyofillangan aralash | 1 dona |
| 10 × Primer aralashmasia | 5 mkl |
| Shablonlar DNK/RNK b | × mL |
| Nukleazsiz suv | 50 mL gacha |
Eslatmalar:
1) a.10×Primer aralashmasi: 16 mkM FIP/BIP, 2 mkM F3/B3, 4 mkM pastadir F/B;
2) b.Nuklein kislota templ uchun DEPC (suvda eruvchan) tavsiya etiladi.
1.65°C da 30-45 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, bu vaqtni rang o'zgarishiga qarab mos ravishda uzaytirish mumkin.
2.Yalang'och ko'zga ko'ra, sariq ijobiy, qizil esa salbiy edi.
Eslatmalar
1.Xona haroratida yaxshilab aralashtirish uchun bufer trubasining pastki qismida tuz paydo bo'lishi mumkin, qisqa vaqt ichida burg'ulash yoki quvurlarni bir necha marta aylantirish mumkin.
2.Reaksiya harorati primerlarning holatiga qarab 62 ℃ dan 68 ℃ gacha optimallashtirilishi mumkin.
3.Paketlangan reagentlar uzoq vaqt davomida havoga ta'sir qilmasligi kerak.
4.Qizil va sariq rang o'zgarishi reaktsiyasi reaktsiya tizimining pH o'zgarishiga bog'liq, iltimos, ddH dan foydalanish tavsiya etilgan Tris nuklein kislotasini saqlash eritmasidan foydalanmang.2O saqlanadigan nuklein kislota;
5.Tajriba standartlashtirilgan bo'lishi kerak, shu jumladan reaktsiya tizimini tayyorlash, liyofilizatsiya va namunani qayta ishlash va namuna qo'shish jarayoni;
6.Kontaminatsiyani oldini olish uchun reaktsiya tizimini o'ta toza skameykada tayyorlash tavsiya etiladi, boshqalarida noto'g'ri ijobiy shovqinlarni oldini olish uchun xonaning tutun qopqog'iga shablonlarni qo'shing.
