Ultra nukleaza
UltraNuclease - bu Serratia marcescens-dan olingan genetik muhandislik bilan bog'liq bo'lgan dendonuklaoz bo'lib, u DNK yoki RNKni ikki yoki bir qatorli, chiziqli yoki aylana shaklida parchalashga qodir, nuklein kislotalarni 5'-monofosfat oligonukleotidlarga to'liq parchalaydi. .Genetik muhandislik modifikatsiyasidan so'ng, mahsulot Escherichia coli (E. coli) da fermentlangan, ifodalangan va tozalangan, bu hujayra supernatantining viskozitesini va hujayra lizatining ilmiy tadqiqotlarini pasaytiradi, shuningdek, oqsilni tozalash samaradorligini va funktsional tadqiqotini yaxshilaydi.Bundan tashqari, u gen terapiyasi, viruslarni tozalash, vaktsina ishlab chiqarish, oqsil va polisakkarid farmatsevtika sanoatida asosiy qoldiq nuklein kislotasini olib tashlash reagenti sifatida ishlatilishi mumkin.
Mahsulot xususiyatlari
| CAS raqami. | 9025-65-4 |
| EC raqami. | |
| Molekulyar og'irlik | 30 kDa |
| Izoelektrik nuqta | 6.85 |
| Proteinning tozaligi | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Maxsus faoliyat | ≥1.1×106U/mg |
| Optimal harorat | 37°C |
| Optimal pH | 8.0 |
| Proteaz faolligi | salbiy |
| Biologik yuk | ＜10CFU/100,000U |
| Qoldiq xost-hujayra oqsili | ≤10ppm |
| Og'ir metall | ≤10ppm |
| Bakterial endotoksin | ＜0,25EU/1000U |
| Saqlash buferi | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% glitserin |
Saqlash shartlari
≤0°C tashish;-25~-15°C Saqlash, 2 yil amal qilish (muzlatish-eritishdan saqlaning).
Birlik ta'rifi
△A260 ning yutilish qiymatini 37 °C da 30 daqiqa ichida 1,0 ga o'zgartirish uchun ishlatiladigan ferment miqdori, pH 8,0, oligonükleotidlarga kesish orqali hazm qilingan 37 mkg qizil ikra sperma DNKsiga teng, faol birlik (U) sifatida aniqlandi.
Sifat nazorati
Qoldiq xost-hujayra oqsili: ELISA to'plami
•Proteaz Qoldiqlar: 250KU/ml UltraNuclease substrat bilan 60 daqiqa reaksiyaga kirdi, faollik aniqlanmadi.
•Bakterial endotoksin: LAL-Test, Xitoy Xalq Respublikasi farmakopeyasi 4-jild (2020 yil nashri) gel chegarasini tekshirish usuli.Umumiy qoidalar (1143).
•Biologik yuk: Xitoy Xalq Respublikasi farmakopeyasi 4-jild (2020 yil nashri) — Umumiy
Sterillik sinovi qoidalari (1101), XXR milliy standarti, GB 4789.2-2016.
•Og'ir metall:ICP-AES, HJ776-2015.
Operatsiya
SDS kontsentratsiyasi 0,1% yoki EDTA dan yuqori bo'lsa, UltraNuclease faolligi sezilarli darajada inhibe qilingan
kontsentratsiyasi 1 mM dan ortiq edi. Surfaktant Triton X-100, Tween 20 va Tween 80 nukleazaga ta'sir ko'rsatmadi.
konsentratsiyasi 1,5% dan past bo'lganida xossalari.
| Operatsiya | Optimal operatsiya | Yaroqli operatsiya |
| Harorat | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mm | 1-15 mm |
| DTT | 0-100 mm | >100mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mm | >100mM |
| Monovalent metall ioni (Na+, K+ va boshqalar) | 0-20 mM | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mm | 0-100 mm |
Qo'llash va dozalash
• Vaktsina mahsulotlaridan ekzogen nuklein kislotani olib tashlang, nuklein kislotaning qoldiq zaharliligi xavfini kamaytiring va mahsulot xavfsizligini oshiring.
• Nuklein kislotadan kelib chiqqan ozuqa suyuqligining viskozitesini pasaytiring, ishlov berish vaqtini qisqartiring va oqsil hosildorligini oshiring.
• Muvofiq bo'lgan zarracha (virus, inklyuziya tanasi va boshqalar) o'ralgan nuklein kislotani olib tashlang.
zarrachani chiqarish va tozalashga.
| Eksperimental turi | Protein ishlab chiqarish | Virus, Vaktsina | Hujayra preparatlari |
| Hujayralar soni | 1 g hujayraning nam vazni (10 ml bufer bilan qayta suspenziya qilingan) | 1 l fermentatsiya suyuqlik supernatant | 1 l madaniyat |
| Minimal doza | 250U | 100U | 100U |
| Tavsiya etilgan doza | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleaza bilan ishlov berish ustun xromatografiyasi, elektroforez va blotting tahlillari uchun namunaning rezolyutsiyasini va tiklanishini yaxshilashi mumkin.
• Gen terapiyasida nuklein kislota tozalangan adeno bilan bog'liq viruslarni olish uchun chiqariladi.
