Warm Start Bst 2.0 DNK polimeraza (glitserinsiz)
Bst DNK polimeraza V2 Bacillus stearothermophilus DNK polimeraza I dan olingan bo'lib, u 5'→3' DNK polimeraza faolligi va kuchli zanjir almashtirish faolligiga ega, ammo 5'→3' ekzonukleaza faolligi yo'q.Bst DNK Polimeraza V2 ipni siljitish, izotermik kuchaytirish LAMP (Loop mediated isothermal amplification) va tez ketma-ketlik uchun juda mos keladi.Bst DNK polimeraza V2 - bu Bst DNK polimeraza V2 (HC5005A) ga asoslangan, qayta tiklanadigan modifikatsiyalash texnologiyasi bilan olingan, xona haroratida DNK polimeraza faolligini inhibe qilishi mumkin bo'lgan issiq ishga tushirish versiyasidir, shuning uchun reaktsiya tizimi ishlamasligi va oldini olish uchun xona haroratida ishlashi mumkin. -o'ziga xos kuchaytirish va reaktsiya samaradorligini oshirish va bu versiyani liyofilizatsiya qilish mumkin.Bundan tashqari, uning faolligi yuqori haroratlarda chiqariladi, shuning uchun alohida faollashtirish bosqichiga ehtiyoj qolmaydi.
Komponentlar
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNK polimeraza V2 (glitserinsiz) (8U/mkl) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 bufer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Ilovalar
1.LAMP izotermik kuchaytirish
2.DNK zanjirining bitta joy almashish reaktsiyasi
3.Yuqori GC gen sekvensiyasi
4.Nanogramma darajasidagi DNK ketma-ketligi.
Saqlash holati
0 ° C ostida tashish va -25 ° C ~ -15 ° C haroratda saqlanadi.
Birlik ta'rifi
Bitta birlik 65°C da 30 daqiqada kislotada erimaydigan moddaga 25 nmol dNTP ni birlashtirgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
1.Protein tozaligi tahlili (SDS-PAGE):Bst DNK polimeraza V2 ning tozaligi Coomassie Blue aniqlash yordamida SDS-PAGE tahlili orqali ≥99% ni tashkil qiladi.
2.EnonukleazaFaoliyat:Minimal 8 U Bst DNK polimeraza V2 ni 1 mkg lDNK bilan o‘z ichiga olgan 50 mkL reaksiyani 37 ℃ da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
3.Eksonukleaza faoliyati:Minimal 8 U Bst DNK polimeraza V2 va 1 mkg l -Hind Ⅲ hazm bo'ladigan DNKni o'z ichiga olgan 50 mkl reaktsiyani 37 ℃ da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
4.Nikase faoliyati:Minimal 8 U Bst DNK polimeraza V2 ni 1 mkg pBR322 DNK bilan o‘z ichiga olgan 50 mkl reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
5.RNaz faolligi:Kamida 8 U Bst DNK polimeraza V2 va 1,6 mkg MS2 RNK bilan 50 mkL reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
6.E. coliDNK:120 U Bst DNK polimeraza V2 E. coli 16S rRNK lokusuga xos primerlar bilan TaqMan qPCR yordamida E. coli genomik DNKsi mavjudligi uchun tekshiriladi.E. coli genomik DNK ifloslanishi ≤1 nusxa.
LAMP reaktsiyasi
| Komponentlar | 25mL |
| 10×HC Bst V2 bufer | 2,5 mkl |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 mkl |
| dNTPs (har biri 10 mM) | 3,5 mkl |
| SYTO™ 16 Yashil (25×)a | 1,0 mkl |
| Primer aralashmasib | 6 mkl |
| Bst DNK polimeraza V2 (glitserinsiz) (8 U/uL) | 1 mkl |
| Shablon | × mL |
| ddH₂O | 25 mL gacha |
Eslatmalar:
1) a.SYTOTM 16 Yashil (25 ×): Eksperimental ehtiyojlarga ko'ra, boshqa bo'yoqlardan o'rinbosar sifatida foydalanish mumkin;
2) b.Primer aralashmasi: 20 μ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB va boshqa hajmlarni aralashtirish orqali olinadi.
Reaktsiya va holat
1 × HC Bst V2 Bufer, inkubatsiya harorati 60°C va 65°C orasida.
Issiqlik inaktivatsiyasi
80 ° C, 20 daqiqa
