CHO HCP ELISA to'plami
Ushbu tahlilda bir bosqichli immunosorbent Elishay usuli qo'llaniladi.CHOK1 HCP o'z ichiga olgan namunalar bir vaqtning o'zida ELISA plastinkasida qoplangan HRP etiketli echkiga qarshi CHOK1 antikori va anti-CHOK1 antikori bilan reaksiyaga kirishadi va nihoyat qattiq fazali antikor-HCP etiketli antikorning sendvich kompleksini hosil qiladi.Bog'lanmagan antigen-antikor Elishay plastinkasini yuvish orqali olib tashlanishi mumkin.TMB substrati yetarlicha reaktsiya uchun quduqqa qo'shiladi.To'xtash eritmasi qo'shilgandan so'ng rang rivojlanishi to'xtatiladi va 450/650 nm da reaktsiya eritmasining OD yoki absorbans qiymati mikroplata o'quvchi bilan o'qiladi.OD qiymati yoki absorbans qiymati eritmadagi HCP tarkibiga proportsionaldir.Shundan kelib chiqib, eritmadagi HCP konsentratsiyasini standart egri chiziq bo'yicha hisoblash mumkin.
Ilova
Ushbu to'plam namunalardagi CHOK1 mezbon hujayra oqsili qoldiqlarini miqdoriy aniqlash uchun ishlatiladi.
Cmuxoliflar
| S/N | Komponent | Diqqat | Saqlash shartlari |
| 1 | CHOK1 HCP standarti | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, yorug'likdan saqlang |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, yorug'likdan saqlang |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Yechimni to'xtating | NA | RT |
| 6 | Mikroplastinka yopishtiruvchi vositalar | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Yuqori adsorbsion oldingi qoplama plitalari | NA | 2-8℃ |
Kerakli uskunalar
| Sarf materiallari / Uskunalar | Ishlab chiqarish | Katalog |
| Mikroplata o'quvchi | Molekulyar qurilmalar | Spectra Max M5, M5e yoki ekvivalenti |
| Termomikser | Ependorf | Eppendorf/5355 yoki ekvivalenti |
| Vorteks mikser | IKA | MS3 Digital yoki ekvivalenti |
Saqlash va barqarorlik
1.-25~-15°C da tashish.
2.Saqlash shartlari 1-jadvalda ko'rsatilganidek;1-2 komponentlar ≤–20°C da saqlanadi, 5-6 RT saqlanadi,3、4、7、8 2-8 ℃ haroratda saqlanadi;amal qilish muddati - 12 oy.
Mahsulot parametrlari
1.Sezuvchanlik: 1ng/ml
2.Aniqlash diapazoni: 3-100ng/ml
3.Aniqlik: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.HCP qamrovi: >80%
5.O'ziga xoslik: Bu to'plam universaldir, chunki u tozalash jarayonidan mustaqil ravishda CHOK1 HCP bilan reaksiyaga kirishadi.
Reaktiv tayyorlash
1.PBST 0,05%
20×PBST 0,05% dan 15 ml oling, ddH da suyultiriladi2O, va 300 ml gacha.
2.1,0% BSA
Shishadan 1 g BSA oling va 100 ml PBST 0,05% ga suyultiriladi, to'liq eriguncha yaxshilab aralashtiriladi va 2-8 ° C haroratda saqlanadi.Tayyorlangan suyultirish buferi 7 kun davomida amal qiladi.Zarur bo'lganda tayyorlash tavsiya etiladi.
3.Aniqlash eritmasi 2 mkg/ml
48 mkL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP oling va yakuniy konsentratsiyasi 2 mkg/ml aniqlash uchun eritmani olish uchun 11,952 mkL 1% BSAda suyultiriladi.
4.QC va CHOK1 HCP standartlarini tayyorlash
| Quvur Yo'q. | Asl | Diqqat | Ovoz balandligi | 1% BSA | umumiy hajmi | Final |
| A | Standart | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Jadval: QC va standartlarni tayyorlash
Tahlil qilish tartibi
1.Reagentlarni yuqoridagi “Reagent tayyorlash” bo‘limida ko‘rsatilganidek tayyorlang.
2.Har bir quduqqa 50 mkl standartlar, namunalar va QC (3-jadvalga qarang) oling, so'ngra 100 mkl Detection eritmasini (2 mkg/ml) qo'shing;Plastinani plomba bilan yoping va ELISA plastinkasini termomikser ustiga qo'ying.2 soat davomida 500 rpm, 25 ± 3 ℃ da inkubatsiya qiling.
3.Mikroplastinkani lavaboga aylantiring va qoplama eritmasini tashlang.Elishay plastinkasini yuvish va eritmani tashlash uchun har bir quduqqa 300 mkl PBST 0,05% pipetka soling va yuvishni 3 marta takrorlang.Plitani toza qog'oz sochiq ustiga aylantiring va quriting.
4.Har bir quduqqa 100 mkL TMB substrat qo'shing (1-jadvalga qarang), Elishay plastinkasini yoping va qorong'i joyda 25±3℃ haroratda 15 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
5.Har bir quduqqa 100 mkl to'xtatuvchi eritmani pipetka bilan seping.
6.Mikroplastinka o'quvchi bilan 450/650nm to'lqin uzunligida absorbansni o'lchang.
7.SoftMax yoki shunga o'xshash dastur yordamida ma'lumotlarni tahlil qiling.To'rt parametrli logistik regressiya modelidan foydalangan holda standart egri chizilgan.
Standart egri chiziq misoli
QAYD: Agar namunadagi HCP kontsentratsiyasi standart egri chiziqning yuqori chegarasidan oshsa, sinovdan oldin uni suyultirish buferi bilan to'g'ri suyultirish kerak.
QAYDLAR
To'xtatuvchi eritma 2M sulfat kislotadir, sachramasligi uchun ehtiyotkorlik bilan ishlang!
