mag'rur
Mahsulotlar
T7 RNK polimeraza HCP1011A Tavsiya etilgan rasm
  • T7 RNK polimeraza HCP1011A

T7 RNK polimeraza


Mushuk raqami: HCP1011A

Paket: 100mL/1mL/10mL/100mL

T7 RNK polimeraza T7 fagdan DNKga bog'liq RNK polimerazadir

Mahsulot tavsifi

Mahsulot ma'lumotlari

T7 RNK polimeraza T7 fagining DNKga bog'liq RNK polimeraza bo'lib, u kuchli va o'ziga xos 5´→ 3´ RNK polimeraza faolligiga ega. T7 RNK polimeraza T7 promotor sekanslari uchun yuqori o'ziga xoslikka ega va DNK fragmentidan katta miqdorda RNK sintez qiladi. promouterdan quyi oqimga kiritilgan.


  • Oldingi:
  • Keyingisi:

  • Komponentlar

    T7 RNK polimeraza (50 U/mkl)

    10×HH T7 buferi

    Saqlash shartlari

    0 ° C ostida tashish va -25 ~ - 15 ° C da saqlash.

    Spetsifikatsiya

    Mahsulot nomi

    T7 RNK polimeraza

    Mahsulot tavsifi

    Shaffof suyuqlik

     

    Faoliyat birligi ta'rifi

    Bitta birlik ferment miqdori sifatida aniqlanadi

    1 nmol PPi hosil qilish uchun NTP ni katalizlaydi

    Standart reaksiya tizimida 37°C da 1 soat.

    Saqlash buferi

    50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 20 mM b-M, 1 mM EDTA, 50% glitserin ,0.1% (w/v)

    Triton® X- 100, pH 7,9 @ 25°C.

     

    10×HH T7 buferi

    400 mM Tris-HCl (25℃, pH 8,20), 60 mM

    MgCl2 ,100 mM DTT, 20 mM spermidin.

    Saqlash holati

    -25 ~ – 15 ℃, takroriy muzlash-erishdan saqlaning

     

    Reaktsiya va holat

    An'anaviy reaktsiya

    Reaktiv

    Miqdori

    Nukleazsiz H2O yoki DEPC bilan tozalangan suv

    20 mL gacha

    10×HH T7 bufer

    2 mL

    ATP/GTP/CTP/UTP (har biri 100 mM)

    Har biri 0,4 mL (2 mMeach Final)

    RNaz inhibitori (40 U/mkl) (ixtiyoriy)

    1 mkl (40 U)

    Noorganik pirofosfataza (ixtiyoriy)

    0,5 mL (0,05U)

    T7 RNK polimeraza (50 U/mL)

    1 mkl

    Lineerlashtirilgan DNK shabloni

    1 mkg

    Reaksiya komponentlarini yuqoridagi tartibda qo'shing * 10 × HH T7 bufer faqat 2 mM NTPlar uchun mos keladi, boshqa yuqori rentabellikli T7 transkripsiya to'plamlari 7,5 mM-10 mM NTPlar uchun tavsiya etiladi.

    Inkubatsiya vaqti:2 soat davomida 37 ° C haroratda.

    Stop Reaktsiya: 2mL 0,2 M EDTA (pH8,0@25℃) qo‘shing yoki 10 daqiqa davomida 75 °C ga qizdiring.

    DNKni olib tashlash: DNK shablonini 2U DNase I (RNazsiz) bilan olib tashlash va 37 ° da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilish mumkin.

     

    Sifat nazorati

    Endonukleaz faoliyati: Kamida 50U T7 RNAPolimeraza o'z ichiga olgan 50 mkl reaktsiyani 1 mkg lDNK bilan 37 ℃ da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.

    Eksonukleaza faoliyati: Kamida 50U T7 RNK polimerazasini o'z ichiga olgan 50 mkl reaktsiyani 1 mkg l -Hind Ⅲ hazm DNK bilan 37 ℃ da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.

    Nikase Faoliyat: Kamida 50U T7 RNK polimerazasini 1 mkg pBR322 DNK bilan o‘z ichiga olgan 50 mkl reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday aniqlanmaydigan degradatsiyaga olib kelmaydi.

    RNase Faoliyat: Kamida 50U T7 RNK polimerazasini 1,6 mkg MS2 RNK bilan o‘z ichiga olgan 50 mkl reaksiyani 37°C da 16 soat davomida inkubatsiya qilish, aniqlanganidek, hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.

    Issiqlik inaktivatsiyasi: 10 daqiqa davomida 75 °C.

     

    Ehtiyotkorlik

    • Transkripsiya reaktsiyasi RNase bilan ifloslanmagan muhitda amalga oshirilishi kerak.Qo'lqop kiyish tavsiya etiladi.Maslahatlar, quvurlar va suv nukleazsiz bo'lishi kerak.

    • RNK ishlab chiqarish rentabelligini NTP kontsentratsiyasini oshirish orqali yaxshilash mumkin (har bir konsentratsiya 10 mM ga yetishi mumkin), Mg2+ konsentratsiyasi esa mos ravishda oshirilishi kerak.

    • RNK sintezi reaktsiyasi aralashmasi xona haroratida tayyorlanishi kerak, chunki DNK 4°C da 10×HH T7 Bufer ishtirokida cho'kishi mumkin.

    • Agar shablon DNK to'liq chiziqli bo'lmagan bo'lsa, tegishli uzunlikdagi transkriptlarning rentabelligi kamayadi.•Reaksiya aralashmasini kattalashtirish yoki kamaytirish mumkin.• Agar reaksiya mahsuloti unumi kamaysa, reaksiya tizimiga 20 mM yangi DTT qo'shilishi mumkin.

    • Transkripsiya qilingan fragmentlar 500bp dan kam yoki unga teng bo'lib, transkripsiya vaqtini 4-8 soatgacha uzaytirish tavsiya etiladi.

    •10×HH T7 da cho‘kmalarni topish oson.

    Xabaringizni shu yerga yozing va bizga yuboring