Sichqoncha genotiplash to'plami

Mushuk raqami: HCR2021A

Ushbu mahsulot sichqoncha genotiplarini, jumladan DNK xom ashyosini ekstraksiya qilish va PCR kuchaytirish tizimini tezkor aniqlash uchun mo'ljallangan to'plamdir.Mahsulot sichqonchaning dumi, quloq, oyoq barmog'i va boshqa to'qimalardan to'g'ridan-to'g'ri PCR kuchaytirilishi uchun Lysis Bufer va Proteinase k tomonidan oddiy parchalanishdan so'ng ishlatilishi mumkin.Bir kechada hazm qilish, fenol-xloroform ekstraktsiyasi yoki ustunni tozalash yo'q, bu oddiy va tajribalarning vaqtini qisqartiradi.Mahsulot 2 kb gacha bo'lgan maqsadli fragmentlarni kuchaytirish va 3 juft primer bilan multipleks PCR reaktsiyalari uchun javob beradi.2 × Sichqoncha Tissue Direct PCR Mix tarkibida genetik jihatdan yaratilgan DNK polimeraza, Mg²⁺, dNTPs va optimallashtirilgan bufer tizimi yuqori kuchaytiruvchi samaradorlik va inhibitor bardoshliligini ta'minlaydi, shuning uchun PCR reaktsiyalari shablon va primerlarni qo'shish va mahsulotni 1 × ga regidratsiya qilish orqali amalga oshirilishi mumkin.Ushbu mahsulot bilan kuchaytirilgan PCR mahsuloti 3′ uchida ko'zga ko'ringan “A” asosga ega va uni tozalashdan keyin to'g'ridan-to'g'ri TA klonlash uchun ishlatilishi mumkin.

Komponentlar

Saqlash shartlari

Mahsulotlar 2 yil davomida -25 ~ -15 ℃ haroratda saqlanishi kerak.Eritgandan so'ng, Lysis Bufer qisqa muddatli ko'p marta ishlatish uchun 2 ~ 8 ℃ haroratda saqlanishi mumkin va foydalanilganda yaxshilab aralashtiriladi.

Ilova

Ushbu mahsulot sichqonchani nokaut tahlili, transgenik aniqlash, genotiplash va boshqalar uchun javob beradi.

Xususiyatlari

1.Oddiy operatsiya: genomik DNKni olishning hojati yo'q;

2.Keng qo'llanilishi: turli sichqoncha to'qimalarini to'g'ridan-to'g'ri kuchaytirish uchun javob beradi.

Ko'rsatmalar

1.Genomik DNKning chiqarilishi

1) Lizatni tayyorlash

To'qimalar lizati lizitsiya qilinadigan sichqoncha namunalari soniga qarab tayyorlanadi (to'qima lizati dozaga muvofiq joyida tayyorlanishi va foydalanish uchun yaxshilab aralashtirilishi kerak) va bitta namuna uchun zarur bo'lgan reagentlar nisbati quyidagicha:

2) Namuna tayyorlash va lizis

Tavsiya etilgan to'qimalardan foydalanish

Toza santrifüj naychalarida sichqoncha to'qimalarining namunalarini oling, har bir santrifuga trubasiga 200 mkl yangi to'qima lizatini qo'shing, aylantiring va silkiting, so'ngra 55 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling va keyin 3 daqiqa davomida 98 ℃ da qizdiring.

3) sentrifugalash

Lizatni yaxshilab silkiting va 5 daqiqa davomida 12000 rpm tezlikda sentrifuga qiling.Supernatant PCR kuchaytirilishi uchun shablon sifatida ishlatilishi mumkin.Agar shablon saqlash uchun kerak bo'lsa, supernatantni boshqa steril santrifüj naychasiga o'tkazing va 2 hafta davomida -20 ℃ haroratda saqlang.

2.PCR kuchaytirilishi

2 × Sichqoncha to'qimasini to'g'ridan-to'g'ri PCR aralashmasini -20 ℃ dan olib tashlang va muz ustida eritib oling, teskari aralashtiring va quyidagi jadvalga muvofiq PCR reaktsiya tizimini tayyorlang (muz ustida ishlang):

Eslatma:

a) Qo'shilgan miqdor tizimning 1/10 qismidan oshmasligi kerak va agar juda ko'p qo'shilsa, PCR kuchaytirilishi inhibe qilinishi mumkin.

Tavsiya etilgan PCR shartlari

Eslatma:

a) Yuvish harorati: Astarning Tm qiymatiga asoslanib, yumshatish haroratini primerning kichikroq Tm qiymatiga +3 ~ 5 ℃ o'rnatish tavsiya etiladi.

Umumiy muammolar va yechimlar

1.Maqsadli chiziqlar yo'q

1) Haddan tashqari lizis mahsuloti.Shablonning eng mos miqdorini tanlang, odatda tizimning 1/10 qismidan ko'p bo'lmagan;

2) Namuna hajmi juda katta.Lizatni 10 marta suyultiring va keyin kuchaytiring yoki namuna hajmini kamaytiring va qayta lizing;

3) To'qimalar namunalari yangi emas.Yangi to'qimalar namunalaridan foydalanish tavsiya etiladi;

4) Astar sifati past.Primer sifatini tekshirish va primer dizaynini optimallashtirish uchun kuchaytirish uchun genomik DNKdan foydalaning.

2.O'ziga xos bo'lmagan kuchaytirish

1) Yuvish harorati juda past va aylanish soni juda yuqori.Yuvish haroratini oshiring va tsikllar sonini kamaytiring;

2) Shablon konsentratsiyasi juda yuqori.Shablon miqdorini kamaytiring yoki kuchaytirilgandan keyin shablonni 10 marta suyultiring;

3) Astarning o'ziga xosligi past.Astar dizaynini optimallashtiring.

Eslatmalar

1.Namunalar o'rtasida o'zaro ifloslanishni oldini olish uchun bir nechta namuna olish asboblarini tayyorlash kerak va agar takroriy foydalanish kerak bo'lsa, har bir namunadan so'ng asboblar yuzasi 2% natriy gipoxlorit eritmasi yoki nuklein kislota tozalagich bilan tozalanishi mumkin.

2.Sichqonchaning yangi to'qimalaridan foydalanish tavsiya etiladi va kuchaytirish natijalariga ta'sir qilmaslik uchun namuna olish hajmi juda katta bo'lmasligi kerak.

3.Lizis buferi tez-tez muzlashdan saqlanishi kerak va qisqa muddatli bir necha marta foydalanish uchun 2 ~ 8 ℃ haroratda saqlanishi mumkin.Agar past haroratda saqlansa, yog'ingarchilik paydo bo'lishi mumkin va ishlatishdan oldin to'liq eritilishi kerak.

4.PCR aralashmasi tez-tez muzlashdan saqlanish kerak va qisqa muddatli takroriy foydalanish uchun 4 ℃ haroratda saqlanishi mumkin.

5.Ushbu mahsulot faqat ilmiy eksperimental tadqiqotlar uchun mo'ljallangan va klinik tashxis yoki davolashda foydalanilmasligi kerak.