Rnase inhibitori (glitserinsiz)
Murin RNase inhibitori E.coli dan ifodalangan va tozalangan rekombinant sichqon RNaz inhibitori.U RNase A, B yoki C bilan 1:1 nisbatda kovalent bo'lmagan bog'lanish orqali bog'lanadi va shu bilan uchta fermentning faolligini inhibe qiladi va RNKni parchalanishdan himoya qiladi.Biroq, u RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H yoki RNase Aspergillusga qarshi samarali emas.Murin RNase inhibitori RT-PCR, RT-qPCR va IVT mRNK tomonidan sinovdan o'tkazildi va turli xil tijorat teskari transkriptazalar, DNK polimerazalar va RNK polimerazalari bilan mos edi.
Inson RNase ingibitorlari bilan solishtirganda, sichqoncha RNase inhibitori oksidlanishga juda sezgir bo'lgan ikkita sisteinni o'z ichiga olmaydi, bu inhibitorning inaktivatsiyasiga olib keladi.Bu uni DTT ning past konsentratsiyasida (1 mM dan kam) barqaror qiladi.Bu xususiyat uni DTT ning yuqori konsentratsiyasi reaktsiyaga salbiy ta'sir ko'rsatadigan reaktsiyalarda foydalanish uchun mos qiladi (masalan, Real-time RT-PCR).
Ailova
Ushbu mahsulot RNK degradatsiyasini oldini olish uchun RNaz aralashuvi mumkin bo'lgan har qanday tajribada keng qo'llanilishi mumkin, masalan:
1.Birinchi zanjirli cDNK sintezi, RT-PCR, RT-qPCR va boshqalar;
2.RNKni in-vitro transkripsiyasi/translyatsiyasi degradatsiyasidan himoya qilish (masalan, in vitro virusli replikatsiya);
3.RNKni ajratib olish va tozalash jarayonida RNaz faolligini inhibe qilish.
Saqlash shartlari
-25～-15℃ haroratda saqlang;
Muzlatish-eritish davrlari ≤ 5 marta;
1 yil davomida amal qiladi.
Birlik ta'rifi
Bir birlik 5 ng RNase A faolligini 50% ga inhibe qilish uchun zarur bo'lgan RNaz inhibitori miqdori sifatida aniqlanadi.
Molekulyar og'irlik
RNaz inhibitori (glitserinsiz) 50 kDa oqsildir.
Sifat nazorati
Eksonukleaza Faoliyat:
40 U fermentni 1 mkg l-Hind III digest DNK bilan 16 soat davomida 37°C da inkubatsiya qilish jel elektroforezi bilan aniqlangan DNKning aniqlanmaydigan degradatsiyasiga olib kelmadi.
Endonukleaz faolligi:
40 U fermentni 1 mkg l DNK bilan 16 soat davomida 37°C da inkubatsiya qilish jel elektroforezi bilan aniqlangan DNKning aniqlanmaydigan degradatsiyasiga olib kelmadi.
Nicking Faoliyat:
40 U fermentni 1 mkg pBR322 bilan 16 soat davomida 37 ℃ da inkubatsiya qilish jel elektroforezi bilan aniqlangan DNKning aniqlanishi mumkin bo'lmagan degradatsiyasiga olib kelmadi.
RNase Faoliyat:
40 U fermentni 1,6 mkg MS2 RNK bilan 4 soat davomida 37 ℃ da inkubatsiya qilish jel elektroforezi bilan aniqlangan RNKning aniqlanishi mumkin bo'lmagan degradatsiyasiga olib kelmadi.
E.coli DNKsi:
40 U ferment TaqMan qPCR tomonidan aniqlanadi.E.coli DNKsi ≤ 0, 1pg/40U.
Notes
1.Ferment inaktivatsiyasini oldini olish uchun silkitmang yoki kuchli aralashtirmang.
2.RNase inhibitori 25 ℃ dan 55 ℃ gacha bo'lgan haroratlarda faol bo'ladi va ≥65 ℃ da inaktivlanadi.
3.RNase H, RNase 1 va RNase T1 ning faolligi inhibe qilinmaydi.
4.RNaz faolligini inhibe qilish uchun pH diapazoni keng (pH 5-9 da faol), pH 7-8 da maksimal faollikni ko'rsatadi.
