Bir qadam RT-qPCR SYBR Green Premix
Mushuk raqami: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix SYBR Green I bo'yog'iga asoslangan floresan miqdorini aniqlash uchun mo'ljallangan.Genga xos primerlar yordamida teskari transkripsiya va qPCR reaktsiyalari bir naychada yakunlanadi, bu esa takroriy qopqoqni ochish va pipetlash operatsiyalariga bo'lgan ehtiyojni bartaraf qiladi, tahlil samaradorligini sezilarli darajada oshiradi va ifloslanish xavfini kamaytiradi.RNK namunalari uchun to'plam samarali cDNK sintezi uchun issiqlikka chidamli teskari transkriptazadan va miqdoriy kuchaytirish uchun HotStart Taq DNK polimerazadan foydalanadi.Optimallashtirilgan bufer tizimida to'plamning sezgirligi yuqori ifodalangan maqsadlar uchun 0,1 pg va o'rtacha ifodalangan maqsadlar uchun 1 pg gacha bo'lishi mumkin.To'plam DNK namunalarini kuchaytirish va miqdorini aniqlash uchun javob beradi.Bu turli o'simlik va hayvonlar namunalari, hujayralar va mikroorganizmlardan nuklein kislotalarni sezgir aniqlash va miqdorini aniqlash imkonini beradi.
Komponentlar
| No | Ism | Ovoz balandligi | Ovoz balandligi |
| 1 | Kengaytirilgan bufer | 250 mkl | 2×1,25 ml |
| 2 | Kengaytirilgan ferment aralashmasi | 20 mkl | 200 mkl |
| 3 | RNase Free H2O | 250 mkl | 2×1,25 ml |
Saqlash shartlari
Ushbu mahsulot 1 yil davomida yorug'likdan -25 ~ -15 ℃ haroratda saqlanishi kerak.
Ko'rsatmalar
1.Reaktsiya tizimining konfiguratsiyasid
| Komponentlar | Hajmi (mL) | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| Kengaytirilgan bufer | 12.5 | 25 | 1× |
| Kengaytirilgan ferment aralashmasi | 1 | 2 | - |
| Oldinga primer (10 mkmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 mkmol/l |
| Teskari astar (10 mkmol/l)a | 0,5 | 1 | 0,2 mkmol/l |
| RNK tamplatasib | X | X | - |
| RNase Free H2Oc | 25 gacha | 50 ga | - |
Eslatmalar:
1) a.Tyakuniy primer kontsentratsiyasi 0,2 mkmol/L ni tashkil etdi, uni 0,1 dan 1 mkmol/L gacha moslashtirish ham mumkin.
2) b.Reagent o'ta sezgir, Jami RNK 1pg-1mkg oralig'ida va inson namunalarini sinovdan o'tkazish 1 pg-100 ng optimal kirishni ko'rsatdi, kerak bo'lganda 15-30 oralig'ida umumiy Ct qiymatini nazorat qiladi.
3) c.Maqsadli gen amplifikatsiyasining haqiqiyligini va takrorlanishini ta'minlash uchun 20 mkl yoki 50 mkL dan foydalanish tavsiya etiladi.
4) d.Iltimos, o'ta toza skameykada tayyorlang va nukleaz qoldiqlari bo'lmagan uchlari va reaktsiya naychalaridan foydalaning;filtrli lentalari bo'lgan maslahatlar tavsiya etiladi.O'zaro kontaminatsiyadan va aerozol bilan ifloslanishdan saqlaning.
2.Reaktsiya dasturi
| Velosiped bosqichi | Temp. | Vaqt | Velosipedlar |
| Teskari transkripsiya | 50℃a | 6 min | 1 |
| Dastlabki denaturatsiya | 95℃ | 5 daqiqa | 1 |
| Amplifikatsiya reaktsiyasi | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Erish egri bosqichi | Asbobning standart sozlamalari | 1 | |
Eslatmalar:
1) a.Teskari transkripsiya harorati eksperimental ehtiyojlarga ko'ra 50-55 ° C oralig'ida tanlanishi mumkin.DNK namunalari uchun teskari transkripsiya jarayoni o'tkazib yuborilishi mumkin.
2) b.Maxsus holatlarda tavlanish/uzaytirish harorati primer Tm qiymatiga qarab sozlanishi mumkin, 60°C tavsiya etiladi.
Eslatmalar
1. Ushbu mahsulot faqat tadqiqot uchun mo'ljallangan.
2. Xavfsizligingiz uchun laboratoriya xalatlari va bir martalik qoʻlqoplar bilan ishlang.
