Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Mushuk raqami: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) shablon sifatida RNKga asoslangan multipleks miqdoriy PCR to'plamidir.Tajriba jarayonida teskari transkripsiya va miqdoriy PCR bir xil naychada amalga oshirildi, bu eksperimental operatsiyani soddalashtirdi va ifloslanish xavfini kamaytirdi.Ushbu to'plamda cDNKning birinchi zanjiri issiqlikka chidamli teskari transkriptaza tomonidan samarali sintez qilingan va HotStart Tag DNK polimeraza tomonidan miqdoriy jihatdan kuchaytirilgan.To'plam asosan optimallashtirilgan MP buferini, fermentlar aralashmasini va boshqalarni o'z ichiga oladi. Bufer eritmasi allaqachon Mg ni o'z ichiga oladi.2+va dNTP.Bundan tashqari, o'ziga xos bo'lmagan PCR kuchaytirilishini samarali ravishda inhibe qiladigan va bir nechta qPCR reaktsiyalarining kuchaytirish samaradorligini oshiradigan omillar qo'shiladi, ular kuchaytirish samaradorligini ta'minlaydi va bir nechta kuchaytirish reaktsiyasini amalga oshiradi.Aerozol bilan ifloslanish xavfini samarali oldini olish uchun dUTP/UDG tizimi qo'shildi.
Komponentlar
1. Bufer
2. Fermentlar aralashmasi
Spetsifikatsiya
| Issiq boshlanish | O'rnatilgan issiq ishga tushirish |
| Aniqlash usuli | Primer-zondni aniqlash |
| PCR usuli | Bir bosqichli RT-qPCR |
| Polimeraza | Taq DNK polimeraza |
| Namuna turi | DNK |
Saqlash shartlari
Mahsulot quruq muz bilan jo'natiladi va 1 yil davomida -25 ~ -15 ℃ da saqlanishi mumkin.Bu tez-tez oldini olish kerakmuzlash-eritish.Alohida saqlash tavsiya etiladi.
Ko'rsatmalar
1.Reaktsiya Tizim
| Komponentlar | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| 2 × MP bufer | 12.5 | 1× |
| Ferment aralashmasi | 1 | - |
| Primer/prob aralashmasi (2,5 mkM) | 3 | 0,3 mkM |
| Shablon RNK | 1-10 | - |
| RNazsiz H2O | 25 gacha | - |
Eslatmalar:
Ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtirishni unutmang, kuchli tebranish natijasida paydo bo'lgan ortiqcha pufakchalardan saqlaning.
a.Primer kontsentratsiyasi: Primer aralashmasi, shu jumladan multipleks primer, vaziyatga qarab optimal primer konsentratsiyasi 0,l dan 1,0mkM gacha bo'lishi mumkin.
b.Prob kontsentratsiyasi: Zond aralashmasi, shu jumladan multipleks zond yorlig'i farqi floresan guruhi, vaziyatga qarab zondning optimal kontsentratsiyasi 0,05 va 0,5 mkM orasida bo'lishi mumkin.
c.Shablonni suyultirish: qPCR juda sezgir va shablonni suyultirish tavsiya etiladi.Tekshirish Ct qiymati 20 dan 35 gacha mos keladi.
d.Tizimni tayyorlash: Iltimos, ultra toza ishchi stolda, pipetka va reaksiya trubkasini nukleaza qoldig'isiz tayyorlang;qurol boshini filtr elementi bilan ishlatish tavsiya etiladi.O'zaro kontaminatsiyadan va aerozol bilan ifloslanishdan saqlaning.
2. Optimallashtirilgan velosiped haydashProtokol
| Velosiped qadam | Temp. | Vaqt | Velosipedlar |
| Teskari transkripsiya | 50℃a | 20 daqiqa | 1 |
| Dastlabki-denaturatsiya | 95℃ | 5 daqiqa | 1 |
| Amplifikatsiya reaktsiyasi | 95℃ | 15 soniya |
40-45 |
| 60℃ b | 30 soniya c |
Eslatmalar:
a.Teskari transkripsiya: harorat 42 ° C yoki 50 ° C ni tanlashi mumkin.
b.Kuchaytirish reaktsiyasi: harorat mo'ljallangan primerlarning Tm qiymatiga qarab o'rnatiladi.
c.Floresan signalini olish: Iltimos, eksperimental protsedurani asbob qo'llanmasi talablariga muvofiq o'rnating.
Eslatmalar
Sog'ligingiz va xavfsizligingizni ta'minlash uchun laboratoriya xalati va qo'lqop kabi zarur shaxsiy himoya vositalarini kiying.
