Proteinaz K (suyuqlik)
Mushuk raqami: HC4502A
Proteinaz K - keng substrat o'ziga xosligi bilan barqaror serin proteaza.Yuvish vositalarining mavjudligida ham ko'plab oqsillarni mahalliy holatda buzadi.Kristal va molekulyar tuzilmalarni o'rganish dalillari fermentning faol katalitik triadaga ega subtilisinlar oilasiga tegishli ekanligini ko'rsatadi (Asp).39-Uniki69- Ser224).Yirilishning asosiy joyi - bloklangan alfa aminokislotalarga ega bo'lgan alifatik va aromatik aminokislotalarning karboksil guruhiga tutashgan peptid aloqasi.U keng tarqalganligi uchun ishlatiladio'ziga xoslik.
Spetsifikatsiya
| Tashqi ko'rinish | Rangsiz yoki och jigarrang suyuqlik |
| Faoliyat | ≥800 U/ml |
| Protein kontsentratsiyasi | ≥20 mg/ml |
| DNase | Hech kim aniqlanmadi |
| RNase | Hech kim aniqlanmadi |
Saqlash shartlari
2-8 ℃ haroratda saqlang.
Xususiyatlari
| EC raqami | 3.4.21.64 (RTritirachium albomidan ekombinant) |
| Molekulyar og'irlik | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Izoelektrik nuqta | 7.81 |
| Optimal pH | 7.0-12.0 1-rasm |
| Optimal harorat | 65 ℃ 2-rasm |
| pH barqarorligi | pH 4,5-12,5 (25℃, 16 soat) 3-rasm |
| Termal barqarorlik | 50℃ dan past (pH 8,0, 30 daqiqa) 4-rasm |
| Aktivatorlar | SDS, karbamid |
| Inhibitorlar | diizopropil florofosfat;fenilmetilsulfonil ftorid |
Ilovalar
1. Genetik diagnostika to'plami
2. RNK va DNK ekstraktsiyasi uchun to'plamlar
3. To'qimalardan oqsil bo'lmagan komponentlarni ajratib olish, DNK vaktsinalari kabi oqsil aralashmalarini parchalash va geparin tayyorlash
4. Impulsli elektroforez yordamida xromosoma DNKsini tayyorlash
5. Western blot
6. Enzimatik glikozillangan albumin reagentlari in vitro diagnostikasi
Ehtiyot choralari
Foydalanish yoki tortish paytida himoya qo'lqop va ko'zoynak taqing va foydalanishdan keyin yaxshi havalandırılmalıdır.Ushbu mahsulot terining allergik reaktsiyasiga va ko'zning jiddiy tirnash xususiyati keltirib chiqarishi mumkin.Agar nafas olayotgan bo'lsa, u allergiya yoki astma belgilari yoki nafas qisilishiga olib kelishi mumkin.Nafas olishning tirnash xususiyati keltirib chiqarishi mumkin.
Tahlil
Birlik ta'rifi
Bir birlik (U) quyidagi sharoitlarda minutiga 1 mkmol tirozin hosil qilish uchun kazeinni gidrolizlash uchun zarur bo'lgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Reaktivlarni tayyorlash
Reagent I: 1 g sut kazeini 50 ml 0,1 M natriy fosfat eritmasida (pH 8,0) eritilib, 65-70 ℃ suvda 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi, aralashtiriladi va eritiladi, suv bilan sovutiladi, natriy gidroksid bilan pH8,0 ga sozlanadi va mahkamlanadi. hajmi 100 ml.
Reagent II: TCA eritmasi: 0,1M trikloroatsetik kislota, 0,2M natriy asetat, 0,3M sirka kislotasi.
Reaktiv III: 0,4M Na2CO3yechim.
IV reagent: Forint reaktivi 5 marta toza suv bilan suyultiriladi.
Reagent V: Enzim suyultiruvchi: 0,1M natriy fosfat eritmasi (pH 8,0).
VI reagent: tirozin eritmasi: 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tirozin 0,2M HCl bilan eritilgan.
Jarayon
1. 0,5 ml reagent I 37 ℃ ga oldindan isitiladi, 0,5 ml ferment eritmasi qo'shing, yaxshilab aralashtiriladi va 37 ℃ da 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi.
2. Reaksiyani to'xtatish uchun 1 ml reaktiv II qo'shing, yaxshilab aralashtiramiz va 30 daqiqa davomida inkubatsiyani davom ettiring.
3. Reaksiya eritmasini sentrifugalash.
4. 0,5 ml supernatant oling, 2,5 ml reagent III, 0,5 ml reagent IV qo'shing, yaxshilab aralashtiring va 37 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
5. OD660OD deb belgilandi1;bo'sh nazorat guruhi: 0,5 ml reagent V ODni aniqlash uchun ferment eritmasini almashtirish uchun ishlatiladi660OD sifatida2, DOD=OD1-OD2.
6. L-tirozin standart egri: 0,5 ml turli konsentratsiyali L-tirozin eritmasi, 2,5 ml reagent III, 0,5 ml reagent IV 5 ml santrifüj naychasida, 37 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, OD uchun aniqlang660L-tirozinning har xil konsentratsiyasi uchun Y=kX+b standart egri chizig'i olinadi, bu erda Y L-tirozin kontsentratsiyasi, X OD.600.
Hisoblash
2: Reaksiya eritmasining umumiy hajmi (ml)
0,5: ferment eritmasi hajmi (ml)
0,5: Xromogenni aniqlashda ishlatiladigan reaksiya suyuqligi hajmi (mL)
10: Reaktsiya vaqti (daq)
Df: Ko'p suyultirish
C: Ferment konsentratsiyasi (mg/ml)
Ma'lumotnomalar
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biofizika.Res.Kommun.(1971);44:513.
3. Xilz, X.va boshqalar,Yevro.J. Biokimyo.(1975);56:103–108.
4. Sambruk Jet al., Molekulyar klonlash: Laboratoriya qo'llanmasi, 2-nashr, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Raqamlar
Anjir. 1 Optimal pH
100mM bufer eritmasi: pH6,0-8,0, Na-fosfat;pH8,0-9,0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, Glitsin-NaOH.Ferment konsentratsiyasi: 1mg/ml
2-rasm Optimal harorat
20mM K-fosfat tamponidagi reaksiya pH 8.0.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
3-rasm pH Barqarorlik
25 ℃, 50 mM bufer eritmasi bilan 16 soat ishlov berish: pH 4,5-5,5, asetat;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0-12,5, Glitsin-NaOH.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
4-rasm Termal barqarorlik
50 mM Tris-HCl buferi bilan 30 daqiqa ishlov berish, pH 8.0.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
5-rasm Saqlash barqarorty at 25℃
