Superstart qPCR Premix plus-UNG
Mushuk raqami: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG liyofilizatsiya jarayonlari uchun maxsus ishlab chiqilgan zondga asoslangan aniqlashdan foydalangan holda Real Time PCR sifat va miqdoriy reaktsiyalari uchun mo'ljallangan ixtisoslashtirilgan reaktivdir.Uning tarkibida yangi issiq ishga tushirish fermenti Hotstart Taq plus (DG) mavjud bo'lib, u xona haroratida muhrlangan Taq fermenti faolligiga ega bo'lib, past harorat sharoitida primerning o'ziga xos bo'lmagan tavlanishi yoki primer dimerining shakllanishi natijasida kelib chiqadigan o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirilishini samarali ravishda inhibe qiladi va shu bilan yaxshilanadi. kuchaytirish reaktsiyasining o'ziga xosligi.Ushbu reagent optimallashtirilgan qPCR-ga xos bufer va UNG/dUTP ifloslanishga qarshi tizimdan foydalanadi, bu esa qPCR reaktsiyalarining samaradorligi va sezgirligini sezilarli darajada yaxshilaydi.U keng doiradagi miqdoriy sohalarda yaxshi standart egri chiziqlarni olishi va kantitatsiyani aniq bajarishi mumkin, qoldiq PCR mahsulotlari yoki aerozol bilan ifloslanish natijasida noto'g'ri musbat kuchaytirilishining oldini oladi.Ushbu reagent Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad va Roche va boshqalar kabi ishlab chiqaruvchilarning ko'pgina lyuminestsent miqdoriy PCR asboblari bilan mos keladi va liyofillangan shaklda yaxshi barqarorlikni namoyish etadi.
Reaktiv tarkibi
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bepul) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lioprotektor (ixtiyoriy)
Saqlash shartlari
-20 ℃ da uzoq muddatli saqlash;4 ℃ haroratda 3 oygacha saqlanishi mumkin.Ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtiring vatakroriy muzlatish va eritishdan saqlaning.
Velosiped protokoli
| Jarayon | Temp. | Vaqt | Velosiped |
| Ovqat hazm qilish | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polimeraza faollashishi | 95℃ | 1~5 min | 1 |
| Denatura | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Yuvish va kengaytirish | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR suyuqlik reaktsiyasi Syildiz tayyorlash
|
Tarkibi |
25 µL hajm |
50 µL hajm |
Yakuniy konsentratsiya |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+bepul) (DG) | 5 µL | 10µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotektor1 | 6,25 mkl | 12,5 µL | 1× |
| 25 × Primer-zond aralashmasi2 | 1µL | 2mL | 1× |
| Shablon DNK3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 µL gacha | 50 µL gacha | —— |
1. Primerlar uchun 0,2 mkM yakuniy konsentratsiya odatda yaxshi natijalar beradi;reaktsiya samaradorligi yomon bo'lsa, kerak bo'lganda primer konsentratsiyasini 0,2-1 mkM oralig'ida sozlang.Prob konsentratsiyasi odatda optimal kombinatsiyalarni topish uchun gradient tajribalari orqali 0,1-0,3 mkM oralig'ida optimallashtiriladi.
2. Har xil turdagi shablonlarda mavjud bo'lgan maqsadli genlarning nusxalari soni har xil;Agar kerak bo'lsa, shablonni qo'shishning maqbul miqdorini aniqlash uchun gradient suyultirish amalga oshirilishi mumkin.
3. Bu tizimni liyofilizatsiya qilish mumkin;Mijozlar ushbu tizimni muzlatish-quritish talablarisiz ishlatganda, 4 × lioprotektorni tanlab qo'shilishi mumkin; agar muzlatilgan quritilgan mahsulotlar kerak bo'lsa, suyuq reagentlar bosqichida mahsulotning ishlashini tekshirish paytida, liyofillangan tizim komponentlari bilan muvofiqligini ta'minlash uchun 4 × lioprotektor qo'shilishi kerak. va effektlar.
Tizim ishlatilgandad muzlatib quritish uchun tayyorlang tizimi as quyidagi:
| Tarkibi | 25µL Reaktsiya tizimi |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bepul) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4 × lioprotektor | 6,25 mkl |
| 25 × Primer-zond aralashmasi | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20 µL gacha |
* Agar muzlatib quritish uchun boshqa tizimlar kerak bo'lsa, iltimos, alohida maslahatlashing.
Liyofilizatsiya jarayoniss
| Jarayon | Temp. | Vaqt | Vaziyat | Bosim |
| Oldindan muzlatish | 4℃ | 30 min | Tutmoq |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Sovutish | ||
| -50 ℃ | 180 min | Tutmoq | ||
| Birlamchi quritish | -30℃ | 60 min | Isitish |
Yakuniy vakuum |
| -30℃ | 70 min | Tutmoq | ||
| Ikkilamchi quritish | 25℃ | 60 min | Isitish |
Yakuniy vakuum |
| 25℃ | 300 min | Tutmoq |
2. Yuqoridagi liyofilizatsiya jarayoni faqat ma'lumot uchun.Turli xil mahsulot turlari va turli xil muzlatish quritgichlari har xil parametrlarga ega, shuning uchun o'zgarishlar haqiqiyga qarab amalga oshirilishi mumkin.foydalanish paytidagi sharoitlar.
3. Turli xil liyofilizatsiya jarayonlari liyofillanganlarning turli partiya o'lchamlari uchun mos bo'lishi mumkin.mahsulotlar, shuning uchun keng miqyosli ishlab chiqarish uchun foydalanilganda etarli sinov tekshiruvi o'tkazilishi kerak.
Liyofilizdan foydalanish bo'yicha ko'rsatmalard kukun
1. Liyofilizatsiyalangan kukunni qisqacha santrifüj qiling;
2. Liyofillangan kukunga nuklein kislota shablonini qo'shing va 25 µL gacha suv qo'shing;
3. Santrifugalash orqali yaxshilab aralashtiriladi va mashinada ishlaydi.
Sifat nazorati:
1. Funktsional test: qPCR ning sezuvchanligi, o'ziga xosligi, takrorlanishi.
2. Ekzogen nukleaza faolligi yo'q, ekzogen endo/eksonukleaz bilan ifloslanish yo'q.
Texnik ma'lumotlar:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG 1~5 daqiqa ichida tez ishga tushirishni ta'minlaydigan yangi hot-start fermentidan foydalanadi;maxsus bufer formulasi orqali multipleks floresan miqdoriy PCR reaktsiyalari uchun javob beradi.
2. U yuqori o'ziga xoslikka ega, bu floresan miqdoriy PCR chegarasini aniqlashning sezgirligini sezilarli darajada yaxshilaydi, kuchaytiruvchi egri chiziqlarni normallashtiradi, floresans qiymati past konsentratsiyali shablonlarda aniq yaxshilanishga erishadi, yuqori sezgirlik flüoresans miqdoriy PCR aniqlash reagentlari sifatida mos keladi.
3. Pastroq tavlanish haroratiga ega yoki 200bp dan uzun bo'laklarga ega bo'lgan primerlar uchun 3 bosqichli usul tavsiya etiladi.
4. DUTP dan foydalanish samaradorligi va UNG fermentiga sezuvchanligi turli maqsadli genlar uchun farq qiladi, shuning uchun UNG tizimidan foydalanish aniqlash sezgirligining pasayishiga olib keladigan bo'lsa, reaktsiya tizimini sozlash va optimallashtirish kerak.Agar texnik yordam kerak bo'lsa, kompaniyamiz bilan bog'laning.
5. Kuchaytirishdan oldin va keyin maxsus joylar va pipetkalardan foydalaning, ish paytida qo'lqop kiying va ularni tez-tez almashtiring;namunalarning PCR mahsulotlari bilan ifloslanishini minimallashtirish uchun PCR tugagandan so'ng reaksiya trubkasini ochmang.
