Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) molekulyar og'irligi taxminan 13,7 kDa bo'lgan 4 ta disulfid aloqasini o'z ichiga olgan bir zanjirli polipeptiddir.RNase A endoribonukleaza bo'lib, u C va U qoldiqlarida bir zanjirli RNKni ayniqsa buzadi.Xususan, parchalanish nukleotidning 5'-ribozasi va qo'shni pirimidin nukleotidining 3'-ribozasidagi fosfat guruhi tomonidan hosil bo'lgan fosfodiester bog'lanishini taniydi, shuning uchun 2,3'-tsiklik fosfatlar mos keladigan 3 ga gidrolizlanadi. nukleozid fosfatlar (masalan, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp va A-PG hosil qilish uchun RNase A tomonidan parchalanadi).RNaz A bir zanjirli RNKni parchalashda eng faol hisoblanadi.Tavsiya etilgan ish konsentratsiyasi 1-100 mk G/ml, turli reaksiya tizimlariga mos keladi.Past tuz konsentratsiyasi (0-100 mM NaCl) RNK-DNK gibridizatsiyasi natijasida hosil bo'lgan bir zanjirli RNK, ikki zanjirli RNK va RNK zanjirlarini kesish uchun ishlatilishi mumkin.
Biroq, yuqori tuz konsentratsiyasida (≥0,3 M) RNase A faqat bitta zanjirli RNKni ajratadi.
RNase A ko'pincha plazmid DNK yoki genomik DNKni tayyorlash paytida RNKni olib tashlash uchun ishlatiladi.Tayyorgarlik jarayonida DNase faol bo'ladimi yoki yo'qmi, reaktsiyaga osongina ta'sir qilishi mumkin.Suv hammomida qaynatishning an'anaviy usuli DNase faolligini inaktivatsiya qilish uchun ishlatilishi mumkin.Ushbu mahsulot DNaz va proteazni o'z ichiga olmaydi va ishlatishdan oldin issiqlik bilan ishlov berishni talab qilmaydi.Bundan tashqari, ushbu mahsulot RNase himoya tahlili va RNK ketma-ketligini tahlil qilish kabi molekulyar biologiya tajribalarida ham qo'llanilishi mumkin.
Saqlash shartlari
Mahsulot 2 yil davomida -25 ℃ ~ - 15 ℃ haroratda saqlanishi kerak.
Texnik xususiyatlari
| Tashqi ko'rinish | Kukun |
| Miqdori | 100 mg / 1 g |
| Mahsulot turi | RNaz A |
Ko'rsatmalar
Bu RNase A saqlash eritmasini tayyorlashning keng tarqalgan usullaridan biridir.Bundan tashqari, tayyorlanishi mumkinlaboratoriya yoki ma'lumotnoma adabiyotlarida an'anaviy usullarga muvofiq boshqa usullar bilan (masalan10 mM Tris-HCl, pH 7,5 yoki Tris-NaCl eritmasida to'g'ridan-to'g'ri eriydi)
1. 10 mg/ml RNase A saqlash eritmasini tayyorlash uchun 10 mM natriy asetatdan (pH 5,2) foydalaning.
2. 15 daqiqa davomida 100 ℃ da isitish.
3. Xona haroratiga qadar sovutib oling, 1/10 hajmdagi 1 M Tris-HCl (pH 7,4) qo'shing, uning pH qiymatini 7,4 ga sozlang (uchun).masalan, 500 ml 10 mg/ml RNase saqlash eritmasi 1 M Tris-HCl, pH7.4) qo'shing.
4. Muzlatilgan saqlash uchun -20 ℃ da quyi qadoqlangan, u 2 yilgacha barqaror bo'lishi mumkin.
[Eslatmalar]:
Neytral sharoitda RNaseA eritmasini qaynatganda RNase cho'kmasi hosil bo'ladi;Uni past pH darajasida qaynatib oling va agar yog'ingarchilik bo'lsa, uni kuzatish mumkin, bu protein aralashmalari mavjudligidan kelib chiqishi mumkin.Agar qaynatilgandan keyin cho'kma topilsa, aralashmalar yuqori tezlikda santrifüjlash (13000 rpm) orqali olib tashlanishi mumkin, so'ngra muzlatish uchun pastki qadoqlangan.
Eslatmalar
Iltimos, sog'ligingiz va xavfsizligingizni ta'minlash uchun kerakli shaxsiy himoya vositalarini, masalan, laboratoriya xalati va qo'lqoplarni kiying.
