Uratsil DNK glikozilazasi
Uratsil-DNK glikozilazasi (UNG yoki UDG) molekulyar og'irligi 25 kDa bo'lgan E.coli ning rekombinant klonidir.U urasil o'z ichiga olgan bir va ikki zanjirli DNKdan erkin urasilning chiqarilishini katalizlaydi va RNKga qarshi faol emas va PCR kuchaytiruvchi mahsulotlarning ifloslanishini oldini olish uchun ishlatilishi mumkin.Ta'sir qilish printsipi, agar PCR reaktsiyasida dUTP dTTP o'rniga dU asoslarini o'z ichiga olgan PCR kuchaytiruvchi mahsulot hosil bo'lsa, ferment bir va ikki zanjirli U asoslarining glikozid bog'ini tanlab uzishi mumkinligiga asoslanadi. DNK va PCR amplifikasyon mahsulotini buzadi.
Tavsiya etilgan ilova
Kontaminatsiyani oldini olish kuchaytirilishi
Saqlash holati
Uzoq muddatli saqlash uchun -20 ° C, ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtirish kerak, tez-tez muzlashdan saqlaning.
Saqlash buferi
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizator, 50% glitserin.
Birlik ta'rifi
37°C da 1 mkg dU asosli bir zanjirli DNKni 1 soat ichida parchalash uchun zarur bo‘lgan ferment miqdori 1 birlikni tashkil qiladi.
Sifat nazorati
1.SDS-PAGE elektroforetik tozaligi 98% dan yuqori
2.Kuchaytirish sezgirligi, partiyadan partiyaga nazorat qilish, barqarorlik
3.1U UNG 50 ℃ da 2 daqiqa davomida ishlov berilgandan so'ng, 103 nusxadan past U bo'lgan shablon butunlay parchalanishi kerak va hech qanday kuchaytiruvchi mahsulot ishlab chiqarilmaydi.
4.Ekzogen nukleaz faolligi yo'q
Ko'rsatmalar
Komponentlar | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
10 × PCR buferi (dNTPsiz, Mg²+ozod) | 5 | 1× |
dUTPlar (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 mkM |
dUTP (dTTP o'rniga) | - | 200-600 mkM |
25 mM MgCl2 | 2-8 mkl | 1-4 mM |
5 U/mL Taq | 0,25 | 1,25 U |
5 U/mkl UNG | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 U (0,1-0,5) |
25 × Primer aralashmasia | 2 | 1× |
Shablon | - | <1mkg/reaksiya |
ddH₂O | 50 gacha | - |
Eslatma: a: Agar qPCR/qRT-PCR uchun ishlatilsa, lyuminestsent prob reaksiya tizimiga qo'shilishi kerak.Odatda, 0,2 mkM yakuniy primer konsentratsiyasi yaxshi natijalar berishi mumkin;reaksiya ko'rsatkichi yomon bo'lsa, primer konsentratsiyasini 0,2-1 mkM oralig'ida sozlash mumkin.Odatda, zond konsentratsiyasi 0,1-0,3 mkM oralig'ida optimallashtiriladi.Primer va zondning eng yaxshi kombinatsiyasini topish uchun kontsentratsiya gradienti tajribalarini o'tkazish mumkin.
Eslatmalar
1.UNG fermenti PCR kuchaytirish reaktsiyasidan oldin ifloslangan dUTP kuchaytiruvchi mahsulotlarni reaktsiya tizimidan olib tashlash, so'ngra mahsulotning ifloslanishi tufayli noto'g'ri ijobiy natijalarni oldini olish uchun ishlatilishi mumkin.
2.Kontaminatsiyaga qarshi PCR reaktsiyasida ishlatiladigan UNG fermenti uchun optimal harorat odatda 2 daqiqa davomida 50 ℃;inaktivatsiya holati 5 daqiqa davomida 95 ℃.
3.Tez-tez muzlashdan saqlaning va haroratning katta o'zgarishiga ta'sir qilmang.
4.Kuchaytirilishi kerak bo'lgan turli genlar dUTP dan foydalanish samaradorligi va UNG fermentiga sezgirligiga ega, shuning uchun agar UNG tizimidan foydalanish aniqlash sezgirligining pasayishiga olib keladigan bo'lsa, reaktsiya tizimini sozlash va optimallashtirish kerak, agar sizga texnik yordam kerak bo'lsa, iltimos, murojaat qiling. bizning kompaniyamiz.