Multipleks qPCR prob premiksi
Mushuk raqami: HCB5051A
TaqMan multipleks qPCR Master Mix (bo'yoq asosida) yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslik bilan tavsiflangan, ko'k rangga ega bo'lgan va namuna qo'shish effektiga ega bo'lgan 2 × real vaqt rejimida miqdoriy PCR kuchaytirilishi uchun oldindan yechimdir.Bu mahsulot 2× Mix oldindan aralashtirilgan reagent bo‘lib, bitta reaksiya qudug‘ida to‘rttagacha lyuminestsent miqdoriy PCR reaktsiyalarini amalga oshirish imkonini beradi.Ushbu mahsulot amplifikasyon sezuvchanligi va o'ziga xosligini sezilarli darajada yaxshilaydigan Taq fermentini issiq ishga tushirish uchun genetik jihatdan o'zgartirilgan antikor usulini o'z ichiga oladi.Shu bilan birga, ushbu mahsulot ko'p reaktsiyali tamponni chuqur optimallashtirdi, bu reaktsiyaning kuchaytirish samaradorligini oshirishi va past konsentratsiyali shablonlarning samarali kuchaytirilishiga yordam beradi.Ushbu mahsulot genotiplash va multipleks miqdoriy tahlil uchun ishlatilishi mumkin.
Spetsifikatsiya
| Issiq boshlanish | O'rnatilgan issiq ishga tushirish |
| Aniqlash usuli | Primer-zondni aniqlash |
| PCR usuli | qPCR |
| Polimeraza | Taq DNK polimeraza |
| Namuna turi | DNK |
Saqlash shartlari
Mahsulot quruq muz bilan jo'natiladi va 2 yil davomida -25 ~ -15 ℃ da saqlanishi mumkin.
Ko'rsatmalar
1. ReaksiyaTizim
| Komponentlar | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| 2 × TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primer aralashmasi (10 mkmol/l) a | × | 0,1 - 0,5 mkmol/L |
| Prob aralashmasi (10 mkmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox mos yozuvlar bo'yog'i | 0,5 | 1× |
| Shablon DNK/cDNK | 1-10 | - |
| ddH2O | 25 gacha | - |
Eslatmalar:Kuchli chayqalishdan ortiqcha pufakchalar paydo bo'lmasligi uchun ishlatishdan oldin yaxshilab aralashtiriladi.
a.Primer kontsentratsiyasi: Primer aralashmasi bir nechta juft primerlarni o'z ichiga oladi, odatda har bir primer yakuniy kontsentratsiyasi 0,2 mkmol/L bo'lib, shuningdek, mos ravishda 0,1 dan 0,5 mkmol/L gacha sozlanishi mumkin.
b.Prob kontsentratsiyasi: Prob aralashmasi turli floresan signallarga ega bo'lgan bir nechta zondlarni o'z ichiga oladi va har bir zondning kontsentratsiyasi muayyan vaziyatga qarab 50 va 250 nmol / L oralig'ida sozlanishi mumkin.
1.Rox bo'yoq ma'lumotnomasi: Quduqlar o'rtasida hosil bo'lgan floresans signalining xatosini tuzatish uchun Applied Biosystems kabi Real Time PCR kuchaytiruvchi asbobda qo'llaniladi;bu mahsulotda Rox bo'yoq ma'lumotnomasi mavjud emas.Agar kerak bo'lsa, Cas # 10200 tavsiya etiladi.
2.Shablonni suyultirish: qPCR juda sezgir va foydalanish uchun shablonni suyultirish tavsiya etiladi.Agar shablon cDNK zaxira eritmasi bo'lsa, shablon hajmi umumiy hajmning 1/10 qismidan oshmasligi kerak.
3.Reaktsiya tizimi: maqsadli gen kuchaytirilishining samaradorligi va takrorlanishini ta'minlash uchun 25 mkl, 30 mkl yoki 50 mkl tavsiya etiladi.
4.Tizimni tayyorlash: Iltimos, juda toza skameykada tayyorlang va nukleaza qoldiqlarisiz uchlari va reaktsiya naychalaridan foydalaning;uchlarini filtrli kartridjlar bilan ishlatish tavsiya etiladi.O'zaro kontaminatsiyadan va aerozol bilan ifloslanishdan saqlaning.
2.Reaktsiya dasturi
| Velosiped bosqichi | Temp. | Vaqt | Velosipedlar |
| Dastlabki-denaturatsiya | 95 ℃ | 5 daqiqa | 1 |
| Denaturatsiya | 95 ℃ | 15 soniya | 45 |
| Yuvish/kengaytirish | 60 ℃ | 30 soniya |
Eslatmalar:
1.Yuvish/kengaytirish: Harorat va vaqt mo'ljallangan primer Tm qiymatiga muvofiq mos ravishda sozlanishi mumkin.
2.Floresans signalini olish: Turli qPCR aniqlash asboblari uchun zarur bo'lgan floresans signalini olish vaqti har xil, iltimos, minimal vaqt chegarasiga ko'ra o'rnating.Bir nechta umumiy asboblarning vaqti quyidagicha o'rnatiladi:
20 soniya: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Amaliy biotizimlar 7300
32 soniya: Amaliy biotizimlar 7500
Eslatmalar
Iltimos, sog'ligingiz va xavfsizligingizni ta'minlash uchun kerakli shaxsiy himoya vositalarini, masalan, laboratoriya xalati va qo'lqoplarni kiying!
