BspQI
BspQI E. colida rekombinant tarzda ifodalanishi mumkin, ular ma'lum saytlarni taniy oladi va ostida ishlab chiqariladi.
BspQI, IIs cheklash endonukleazasini cheklovchi endonukleaz, Bacillus sphaericusdan klonlangan va modifikatsiyalangan BspQI genini tashuvchi rekombinant E. coli shtammidan olingan.U ma'lum saytlarni taniy oladi va tanib olish ketma-ketligi va bo'linish joylari quyidagilardir:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Mahsulot xususiyatlari
1. Yuqori faollik, Tez hazm qilish;
2. Yulduzning past faolligi, "skalpel" kabi aniq kesishni ta'minlash;
3. BSA va hayvon kelib chiqishisiz;
Metilatsiyaga sezgirlik
Dmetillanish:Sezuvchan emas;
Dsm metilatsiyasi:Sezuvchan emas;
CpG metilatsiyasi:Sezuvchan emas;
Saqlash shartlari
Mahsulot jo'natilishi kerak ≤ 0 ℃;-25 ~ - 15 ℃ haroratda saqlang.
Saqlash buferi
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 mkg/ml rekombinant albumin, 0.1% Trition X- 100 va 50% glitserin (pH 7,0 @2).
Birlik ta'rifi
Bitta birlik umumiy reaksiya hajmi 50 µL bo‘lgan 50°C da 1 mkg Ichki nazorat DNK ni 1 soat ichida hazm qilish uchun zarur bo‘lgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
Protein tozaligi tahlili (SDS-PAGE):BspQI ning tozaligi SDS-PAGE tahlili bilan aniqlangan ≥95% edi.
RNase:50 ℃ da 4 soat davomida 1,6 mkg MS2 RNK bilan 10U BspQI agaroz gel elektroforezi bilan aniqlanganidek hech qanday degradatsiyaga olib kelmaydi.
Nomaxsus DNaz faolligi:10U BspQI 1 mg l DNK bilan 50 ℃ da 16 soat davomida, 1 soat davomida 50 ℃ bilan solishtirganda agaroz gel elektroforezi bilan aniqlangan ortiqcha DNK hosil qilmaydi.
Ligatsiya va qayta kesish:1 mkg lDNK 10U BspQI bilan hazm qilingandan so'ng, DNK bo'laklari 16ºC da T4 DNK ligaza bilan bog'lanishi mumkin.Va bu bog'langan qismlar BspQI bilan qayta kesilishi mumkin.
E. coli DNK: E. coli 16s rDNKga xos TaqMan qPCR aniqlash E.coli genom qoldig'i ≤ 0,1pg/ul ekanligini ko'rsatdi.
Xost protein qoldig'i:≤ 50 ppm
Bakterial Endotoksin: LAL-test, Xitoy Farmakopeyasi IV 2020 nashriga ko'ra, jel chegarasi sinov usuli, umumiy qoida (1143).Bakterial endotoksin miqdori ≤10 EU/mg bo'lishi kerak.
Reaktsiya tizimi va shartlari
| Komponent | Ovoz balandligi |
| BspQ I (10 U/mkl) | 1 mkl |
| DNK | 1 mkg |
| 10 x BspQ I buferi | 5 mkl |
| dd H2O | 50 mL gacha |
Reaktsiya shartlari: 50 ℃, 1~16 soat.
Issiqlik inaktivatsiyasi: 20 daqiqa davomida 80 ° C.
Tavsiya etilgan reaktsiya tizimi va shartlari nisbatan yaxshi ferment hazm qilish ta'sirini ta'minlashi mumkin, bu faqat ma'lumot uchun, batafsil ma'lumot uchun eksperimental natijalarga qarang.
Mahsulotni qo'llash
Endonukleaza hazm qilishni cheklash, Tez klonlash.
Eslatmalar
1. Fermentning hajmi reaksiya hajmining ≤ 1/10 qismi.
2. Glitserin kontsentratsiyasi 5% dan ortiq bo'lsa, yulduz faolligi paydo bo'lishi mumkin.
3. Substrat tavsiya etilgan nisbatdan past bo'lganda parchalanish faolligi yuzaga kelishi mumkin.
