Proteinaz K mNGS (suyuqlik)
Proteinaz K - keng substrat o'ziga xosligi bilan barqaror serin proteaza.Yuvish vositalarining mavjudligida ham ko'plab oqsillarni mahalliy holatda buzadi.Kristal va molekulyar tuzilmalarni o'rganish dalillari fermentning faol katalitik triadaga ega subtilisinlar oilasiga tegishli ekanligini ko'rsatadi (Asp).39-Uniki69-Ser224).Yirilishning asosiy joyi - bloklangan alfa aminokislotalarga ega bo'lgan alifatik va aromatik aminokislotalarning karboksil guruhiga tutashgan peptid aloqasi.U keng tarqalgan o'ziga xosligi uchun ishlatiladi.Ushbu proteinaz K mNGS uchun maxsus ishlab chiqilgan.Boshqa proteinaz K bilan solishtirganda, u bir xil fermentativ ko'rsatkichlarga ega bo'lgan nuklein kislotasi bilan kamroq ifloslanishni o'z ichiga oladi, bu esa quyi oqim mNGS qo'llanilishini yaxshiroq ta'minlaydi.
Saqlash shartlari
2-8 ℃ 2 yil davomida
Spetsifikatsiya
| Tashqi ko'rinish | Rangsiz yoki och jigarrang suyuqlik |
| Faoliyat | ≥800 U/ml |
| Protein konsentratsiyasi | ≥20 mg/ml |
| Nikase | Hech kim aniqlanmadi |
| DNase | Hech kim aniqlanmadi |
| RNase | Hech kim aniqlanmadi |
Xususiyatlari
| EC raqami | 3.4.21.64(Tritirachium albomidan rekombinant) |
| Izoelektrik nuqta | 7.81 |
| Optimal pH | 7,0- 12,0 1-rasm |
| Optimal harorat | 65 ℃ 2-rasm |
| pH barqarorligi | pH 4,5- 12,5 (25 ℃, 16 soat) 3-rasm |
| Termal barqarorlik | 50 ℃ dan past (pH 8,0, 30 min) 4-rasm |
| Saqlash barqarorligi | 25 ℃ da 12 oy davomida 90% dan ortiq faollik |
| Aktivatorlar | SDS, karbamid |
| Inhibitorlar | diizopropil florofosfat;fenilmetilsulfonil ftorid |
Ilovalar
1. Genetik diagnostika to'plami
2. RNK va DNK ekstraktsiyasi uchun to'plamlar
3. To'qimalardan oqsil bo'lmagan komponentlarni ajratib olish, DNK kabi oqsil aralashmalarini parchalash.vaktsinalar va geparin tayyorlash
4. Impulsli elektroforez yordamida xromosoma DNKsini tayyorlash
5. Western blot
6. Enzimatik glikozillangan albumin reagentlari in vitro diagnostikasi
Ehtiyot choralari
Foydalanish yoki tortish paytida himoya qo'lqop va ko'zoynak taqing va foydalanishdan keyin yaxshi havalandırılmalıdır.Ushbu mahsulot terining allergik reaktsiyasiga va ko'zning jiddiy tirnash xususiyati keltirib chiqarishi mumkin.Agar nafas olayotgan bo'lsa, u allergiya yoki astma belgilari yoki nafas qisilishiga olib kelishi mumkin.Nafas olishning tirnash xususiyati keltirib chiqarishi mumkin.
Birlik ta'rifi
Bir birlik (U) 1 mkmol hosil qilish uchun kazeinni gidrolizlash uchun zarur bo'lgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.Quyidagi sharoitlarda daqiqada tirozin.
Reaktivlarni tayyorlash
Reagent I: 1 g sut kazeini 50 ml 0,1 M natriy fosfat eritmasida (pH 8,0) eritildi, 65-70 ℃ suvda 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi, aralashtiriladi va eritiladi, suv bilan sovutiladi, natriy gidroksid bilan pH 8,0 ga sozlanadi va belgilangan hajmga sozlanadi. 100 ml.
Reagent II: 0,1M trikloroatsetik kislota, 0,2M natriy asetat, 0,3M sirka kislotasi.
Reaktiv III: 0,4M Na2CO3yechim.
IV reagent: Forint reaktivi 5 marta toza suv bilan suyultiriladi.
Reagent V: Enzim suyultiruvchi: 0,1M natriy fosfat eritmasi (pH 8,0).
VI reagent: tirozin eritmasi: 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tirozin 0,2 bilan eritilgan.M HCl.
Jarayon
1. 0,5 ml reagent I 37 ℃ ga oldindan isitiladi, unga 0,5 ml ferment eritmasi qo'shing, yaxshilab aralashtiriladi va inkubatsiya qilinadi.37 ℃ 10 daqiqa.
2. Reaksiyani to'xtatish uchun 1 ml reaktiv II qo'shing, yaxshilab aralashtiramiz va 30 daqiqa davomida inkubatsiyani davom ettiring.
3. Reaksiya eritmasini sentrifugalash.
4. 0,5 ml supernatant oling, 2,5 ml reagent III, 0,5 ml reagent IV qo'shing, yaxshilab aralashtiring va 37 ℃ da inkubatsiya qiling.30 daqiqa davomida.
5. OD660OD deb belgilandi1;bo'sh nazorat guruhi: 0,5 ml reagent V fermentni almashtirish uchun ishlatiladiODni aniqlash uchun yechim660OD sifatida2, DOD=OD1-OD2.
6. L-tirozin standart egri: 0,5 ml turli konsentratsiyali L-tirozin eritmasi, 2,5 ml reagent III, 0,5 ml reagent IV 5 ml santrifüj naychasida, 37 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, OD uchun aniqlang660L-tirozinning har xil konsentratsiyasi uchun Y=kX+b standart egri chizig'i olinadi, bu erda Y L-tirozin kontsentratsiyasi, X OD.600.
Hisoblash
2: Reaksiya eritmasining umumiy hajmi (ml)
0,5: ferment eritmasi hajmi (ml)
0,5: Xromogenni aniqlashda ishlatiladigan reaksiya suyuqligi hajmi (mL)
10: Reaktsiya vaqti (daq)
Df: Ko'p suyultirish
C: Ferment konsentratsiyasi (mg/ml)
Ma'lumotnomalar
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biofizika.Res.Kommun.(1971);44:513.
3. Xilz, X.va boshqalar,Yevro.J. Biokimyo.(1975);56:103–108.
4. Sambruk Jet al., Molekulyar klonlash: Laboratoriya qo'llanmasi, 2-nashr, Cold Spring HarborLaboratoriya matbuoti, Cold Spring Harbor (1989).
Raqamlar
Anjir.1 Optimal pH
100 mM bufer eritmasi: pH6,0-8,0, Na-fosfat;pH8,0-9,0, Tris-HCl;pH9,0-12,5, Glitsin-NaOH.Ferment konsentratsiyasi: 1mg/ml
2-rasm Optimal harorat
20 mM K-fosfat tamponidagi reaksiya pH 8.0.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
3-rasm pH Barqarorlik
25 ℃, 16 soat 50 mM bufer eritmasi bilan ishlov berish: pH 4,5-5,5, asetat;pH 6,0-8,0, Na-fosfat;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0-12,5, Glitsin-NaOH.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
4-rasm Termal barqarorlik
50 mM Tris-HCl buferi, pH 8.0 bilan 30 daqiqa davolash.Ferment konsentratsiyasi: 1 mg/ml
5-rasm Saqlash barqarorty at 25℃
