2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Mushuk raqami: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) DNK ekstraktsiyasisiz yoki namuna tayyorlanmasdan to'g'ridan-to'g'ri namunalardan PCR o'tkazish uchun mo'ljallangan.Ushbu reagent DNK polimerazasi, urasil DNK glikosilazasi (UNG), RNaz inhibitori, MgCl dan iborat.2, miqdoriy PCR (qPCR) uchun dNTPlar (dTTP o'rniga dUTP bilan) va stabilizatorlar.Ushbu reagent yuqori inhibitorga chidamlilikni oldindan shakllantiradi va shuning uchun u tomoq, tupurik, antikoagulyatsion qon, plazma va sarum kabi namunalarni DNK ekstraktsiyasisiz aniqlash uchun bevosita qo'llanilishi mumkin.Reagent antiinhibitor DNK polimeraza va UNG fermenti aralash fermentlari bilan qPCR uchun xususiy buferdan foydalanadi.Shu sababli, u inhibitorlarni o'z ichiga olgan namunalarda maqsadli genlarning yaxshi kuchaytirilishini olishi va PCR qoldiqlari va aerozol ifloslanishidan kelib chiqqan noto'g'ri musbat kuchaytirilishini inhibe qilishi mumkin.Ushbu reagent Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche va boshqalar kabi ko'pgina floresan miqdoriy PCR asboblari bilan mos keladi.
Komponentlar
1. 50×SensiDirect fermenti/UNG aralashmasi
2. 2×SensiDirect Premix buferi (dUTP)
Saqlash shartlari
Barcha komponentlar uzoq muddatli saqlash uchun -20 ℃ va 3 oygacha 4 ℃ haroratda saqlanishi kerak.Iltimos, eritishdan keyin yaxshilab aralashtiriladi va ishlatishdan oldin santrifüj qilinadi.Tez-tez muzlashdan saqlaning.
Velosiped protokoli
| Qadam | Harorat | Vaqt | Velosiped |
| Ovqat hazm qilish | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polimeraza faollashishi | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denatura | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Yuvish/kengaytirish | 56-64 ℃ | 20-60s |
Pipetlash bo'yicha ko'rsatmalar
| Reaktiv | Boshiga hajm reaktsiya | Har bir reaksiya uchun hajm | Yakuniy konsentratsiya |
| 2 × SensiDirect Premix buferi (dUTP) | 12,5 µL | 25µL | 1× |
| 50 × SensiDirect fermenti/UNG aralashmasi | 0,5 mkl | 1µL | 1× |
| 25 × Primer-zond aralashmasi1, 2 | 1µL | 2mL | 1× |
| Namuna3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Umumiy hajm | 25 mkl | 50 mkl | - |
1. Primerning yakuniy konsentratsiyasi odatda 0,2 mkM ni tashkil qiladi.Yaxshiroq natijalarga erishish uchun primer konsentratsiyasini 0,2-1 mkM oralig'ida optimallashtirish mumkin.
2. Umuman olganda, prob konsentratsiyasi 0,1-0,3 mkM oralig'ida optimallashtirilishi mumkin.Probning optimal kontsentratsiyasi real vaqtda PCR kuchaytiruvchi asbobga, zond turiga va lyuminestsent yorliqli moddaning turiga bog'liq.Iltimos, asboblar qo'llanmasiga yoki har bir lyuminestsent probning o'ziga xos talablariga qarang.
3. Har xil turdagi namunalar turli xil turlari va tarkibidagi inhibitor va maqsadli genning nusxasi sonini o'z ichiga oladi.Namuna hajmi haqiqiy holatga qarab hisobga olinishi kerak.Agar kerak bo'lsa, nukleazsiz suv yoki TE buferini qo'shib, namunani suyultiring.
4. Turli namunalarning tavsiya etilgan hajmi:
| Namuna | Bir uchun ovoz balandligi 50 mL reaktsiya | Maksimal nisbat |
| Antikoagulyatsion to'liq qon | 2,5 mkl | 5% |
| Plazma | 15 mkl | 30% |
| Sarum | 10 mkl | 20% |
| Tomoqqa tampon | 10 mkl | 20% |
| Tuprik | 10 mkl | 20% |
Sifat nazorati
1. Funktsiyani aniqlash: qPCR ning sezgirligi, o'ziga xosligi va takrorlanishi.
2. Ekzogen nukleaza faolligi yo'q: ekzogen endonukleaza va ekzonukleaza ifloslanishi yo'q.
Mahsulot eslatmalari
1. Ushbu mahsulot 1-5 daqiqada faollashtirilishi mumkin bo'lgan yangi turdagi DNK polimerazasini qo'llaydi. Uning reaksiya buferi optimallashtirilganligi sababli, u zond usuli yordamida ikki yoki ko'p floresan miqdoriy PCR uchun ko'proq mos keladi.
2. Agar PCR kuchaytirilishining Rn qiymati juda past bo'lsa yoki kuchaytirish aniq inhibe qilingan bo'lsa, namuna miqdorini kamaytirish, reaktsiya hajmini oshirish yoki namunani oldingi suyultirish natijalarni yaxshilashi mumkin.
3. Qon, tupurik, siydik, tomoq va boshqalarni yig'ish klinik mezon talablariga muvofiq bo'lishi kerak va nuklein kislotasi degradatsiyasini oldini olish uchun yangi namunadan foydalanish mumkin.
4. Turli amplikonlarning dUTP ga nisbatan foydalanish samaradorligi va UNGga sezgirligi har xil bo'lgani uchun, UNG tizimidan foydalanganda aniqlash sezgirligi pasaysa, reagentlar optimallashtirilishi kerak.Agar kerak bo'lsa, texnik yordam uchun biz bilan bog'laning.
5. Bir bosqichli reaktsiyalar o'rtasida o'tkaziladigan PCR mahsulotlarini kuchaytirmaslik uchun kuchaytirish uchun maxsus tajriba maydoni va pipetka kerak.Qo'lqop bilan ishlang va tez-tez almashtiring va PCR kuchaytirilgandan so'ng reaksiya trubkasini ochmang.
