Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) molekulyar og'irligi taxminan 13,7 kDa bo'lgan 4 ta disulfid aloqasini o'z ichiga olgan bir zanjirli polipeptiddir.RNase A endoribonukleaza bo'lib, C va U qoldiqlarida bir ipli RNKni maxsus ravishda buzadi.Xususan, parchalanish nukleotidning 5'-ribozasi va qo'shni pirimidin nukleotidining 3'-ribozasidagi fosfat guruhi tomonidan hosil bo'lgan fosfodiester bog'lanishini taniydi, shuning uchun 2, 3'-tsiklik fosfatlar mos keladigan 3 ga gidrolizlanadi. 'nukleozid fosfatlar (masalan, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp va A-PG hosil qilish uchun RNase A tomonidan parchalanadi).RNaz A bir zanjirli RNKni parchalashda eng faol hisoblanadi.Tavsiya etilgan ish kontsentratsiyasi 1-100 mkG / ml ni tashkil qiladi, turli reaktsiya tizimlariga mos keladi.Past tuz konsentratsiyasi (0-100 mM NaCl) RNK-DNK gibridizatsiyasi natijasida hosil bo'lgan bir zanjirli RNK, ikki zanjirli RNK va RNK zanjirlarini kesish uchun ishlatilishi mumkin.Biroq, yuqori tuz konsentratsiyasida (≥0,3 M) RNase A faqat bitta zanjirli RNKni ajratadi.
RNase A ko'pincha plazmid DNK yoki genomik DNKni tayyorlash paytida RNKni olib tashlash uchun ishlatiladi. Tayyorgarlik jarayonida DNase faol bo'ladimi yoki yo'qmi, reaktsiyaga osongina ta'sir qilishi mumkin.Suv hammomida qaynatishning an'anaviy usuli DNase faolligini inaktivatsiya qilish uchun ishlatilishi mumkin.Ushbu mahsulot DNaz va proteazni o'z ichiga olmaydi va ishlatishdan oldin issiqlik bilan ishlov berishni talab qilmaydi.Bundan tashqari, ushbu mahsulot RNase himoya tahlili va RNK ketma-ketligini tahlil qilish kabi molekulyar biologiya tajribalarida ham qo'llanilishi mumkin.
Saqlash shartlari
Mahsulot -25～-15℃ haroratda saqlanishi mumkin, amal qilish muddati 2 yil.
Ko'rsatmalar
Bu RNase A saqlash eritmasini tayyorlashning keng tarqalgan usullaridan biridir.tomonidan ham tayyorlanishi mumkinlaboratoriya yoki ma'lumotnoma adabiyotidagi an'anaviy usullarga muvofiq boshqa usullar (masalan10 mM Tris-HCl, pH 7,5 yoki Tris-NaCl eritmasida to'g'ridan-to'g'ri eriydi)
1. 10 mg/ml RNase A saqlash eritmasini tayyorlash uchun 10 mM natriy asetatdan (pH 5,2) foydalaning.
2. 15 daqiqa davomida 100 ℃ da isitish
3. Xona haroratiga qadar sovutib oling, 1/10 hajmdagi 1 M Tris-HCl (pH 7,4) qo'shing, uning pH qiymatini 7,4 ga sozlang (uchun).masalan, 500 ml 10 g/ml RNase saqlash eritmasi 1M Tris-HCL, PH7.4 qo'shing)
4. Muzlatilgan saqlash uchun -20 ℃ da quyi qadoqlangan, u 2 yilgacha barqaror bo'lishi mumkin.
[Izohlar]: Neytral sharoitda RNaseA eritmasini qaynatganda RNase cho'kmasi hosil bo'ladi;Uni past pH darajasida qaynatib oling va agar yog'ingarchilik bo'lsa, uni kuzatish mumkin, bu protein aralashmalari mavjudligidan kelib chiqishi mumkin.Agar qaynatilgandan keyin cho'kma topilsa, aralashmalar yuqori tezlikda santrifüjlash (13000 rpm) orqali olib tashlanishi mumkin va keyin muzlatish uchun quyi qadoqlangan.
Mahsulot haqida ma'lumot
| Sinonimlar | Ribonukleaza I;Pankreatik ribonukleaza;Ribonukleaza 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolaza;Rnase A;Endoribonulseaz I |
| CAS raqami. | 9001-99-4 |
| Tashqi ko'rinish | Oq liyofillangan kukun |
| Molekulyar og'irlik | ~ 13,7kDa (aminokislotalar ketma-ketligi) |
| Ph qiymati | 7.6 (faoliyat diapazoni 6-10) |
| Mos harorat | 60 ℃ (Faoliyat oralig'i 15-70 ℃) |
| Faollashtiruvchi vosita | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase inhibitori |
| Inaktivatsiya usuli | Isitish orqali faollashtirilmaydi, santrifuga ustunidan foydalanish tavsiya etiladi |
| Kelib chiqishi | Qoramol |
| Eruvchanlik | Suvda eriydi (10mg/ml) |
| Quruqlikda yo'qotish | ≤5,0% |
| Ferment faolligi | ≥60 Kunitz birlik/mg |
| Izoelektrik nuqta | 9.6 |
Eslatmalar
Xavfsizligingiz va sog'ligingiz uchun, iltimos, operatsiya uchun laboratoriya xalati va bir martalik qo'lqop kiying.
