UDG/UNG fermentlari
UDG (urasil DNK glikozilaza) ssDNK va dsDNKdagi urasil asosi va shakar-fosfat magistral o'rtasidagi N-glikozid aloqasining gidrolizlanishini katalizlashi mumkin.U aerozol ifloslanishini osongina nazorat qila oladi va PCR, qPCR, RT-qPCR va LAMP kabi umumiy molekulyar biologiya tizimlari uchun javob beradi.
Texnik xususiyatlari
| Expression Host | Uratsil DNK glikosilaz geni bilan rekombinant E. coli |
| Molekulyar og'irlik | 24. 8kDa |
| Tozalik | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Issiqlik inaktivatsiyasi | 95℃, 5~10 min |
| Birlik ta'rifi | Bir birlik (U) 25 ℃ da 30 daqiqada l mkg dU o'z ichiga olgan dsDNK gidrolizini katalizlash uchun zarur bo'lgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi. |
Saqlash
Mahsulot ikki yil davomida -25 ° C ~ -15 ° C haroratda saqlanishi kerak.
Ko'rsatmalar
1.Quyidagi tizim bo'yicha PCR reaktsiya aralashmasini tayyorlash
| Komponentlar | Hajmi (mL) | Yakuniy konsentratsiya |
| 10×PCR buferi (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Suv) | 1 | 0,2 mmol / eritma |
| Shablon DNK | X | - |
| Primer 1 (10mkmol/L) | 2 | 0,4 mkmol/l |
| Primer 2 (10mkmol/L) | 2 | 0,4 mkmol/l |
| Taq DNK polimeraza (5 U/mkl) | 0. 5 | 0. 05 U/mkl |
| Uratsil DNK glikozilaz (UDG/UNG), 1 U/mkl | 1 | 1 U/mkl |
| ddH₂O | 50 gacha | - |
Eslatma: Eksperimental talablarga muvofiq, dUTP ning yakuniy kontsentratsiyasi 0,2-0,6 mmol / L oralig'ida sozlanishi va 0,2 mmol / L dTTP tanlab qo'shilishi mumkin.
2.Amplifikatsiya jarayoni
| Velosiped bosqichi | Harorat | Vaqt | Velosipedlar |
| dU o'z ichiga olgan shablon degradatsiyasi | 25℃ | 10 daqiqa | 1 |
| UDG faollashuvi, shablonning dastlabki denatüratsiyasi | 95℃ | 5 ~ 10 daqiqa | 1 |
| Denaturatsiya | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Yuvish | 60℃ | 20 sek | |
| Kengaytma | 72℃ | 30sek/kb | |
| Yakuniy kengaytma | 72℃ | 5 min | 1 |
Eslatma: 25 ° C da reaktsiya vaqti eksperimental talablarga muvofiq 5-10 daqiqa ichida sozlanishi mumkin.
Eslatmalar
1.UDG ko'pchilik PCR reaksiya tamponlarida faoldir.
2.Fermentlar ishlatilganda muz qutisida yoki muzli hammomda saqlanishi kerak va foydalanishdan keyin darhol -20 ° C da saqlanishi kerak.
3.Iltimos, sog'ligingiz va xavfsizligingizni ta'minlash uchun kerakli shaxsiy himoya vositalarini, masalan, laboratoriya xalati va qo'lqoplarni kiying!
