Yovvoyi Taq DNK polimeraza
Taq DNK polimeraza Thermus aquaticus YT-1 dan termostabil DNK polimeraza bo'lib, 5'→3' polimeraza faolligiga va 5' flapli endonukleaza faolligiga ega.
Komponentlar
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq buferi | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNK polimeraza (5 U/mkl) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Saqlash holati
0 ° C ostida tashish va -25 ° C ~ -15 ° C haroratda saqlanadi.
Birlik ta'rifi
Bitta birlik 75°C da 30 daqiqada kislotada erimaydigan moddaga 15 nmol dNTP ni birlashtirgan ferment miqdori sifatida aniqlanadi.
Sifat nazorati
1.Protein tozaligi tahlili (SDS-PAGE):Taq DNK polimerazasining tozaligi SDS-PAGE tahlili bilan aniqlangan ≥95% edi.
2.Endonukleaz faoliyati:37 ℃ da 16 soat davomida 1 mkg lDNK bilan kamida 5 U Taq DNK polimeraza aniqlanganidek aniqlanmaydigan degradatsiyaga olib kelmaydi.
3.Eksonukleaza faoliyati:37 ℃ da 16 soat davomida 1 mkg l -Hind Ⅲ hazm bo'ladigan DNK bilan kamida 5 U Taq DNK polimeraza aniqlanganidek, aniqlanmaydigan degradatsiyaga olib kelmaydi.
4.Nikase faoliyati:37°C da 16 soat davomida 1 mkg pBR322 DNK bilan kamida 5 U Taq DNK polimeraza aniqlanganidek hech qanday aniqlanmaydigan degradatsiyaga olib kelmaydi.
5.RNaz faolligi:37°C da 16 soat davomida 1,6 mkg MS2 RNK bilan kamida 5 U Taq DNK polimeraza aniqlanganidek, aniqlanmaydigan degradatsiyaga olib kelmaydi.
6.E. coliDNK:Taq DNK polimerazasining 5 U E. coli 16S rRNK lokusuga xos primerlar bilan TaqMan qPCR yordamida E. coli genomik DNKsi mavjudligi uchun tekshiriladi.E. coli genomik DNK ifloslanishi ≤1 nusxa.
7.PCR kuchaytirilishi (5,0 kb Lambda DNK)- 5 ng Lambda DNK ni o'z ichiga olgan 50 µL reaktsiya 25 ta PCR kuchaytirilishi uchun 5 birlik Taq DNK polimeraza bilan kutilgan 5,0 kb mahsulotga olib keladi.
Reaktsiyani sozlash
| Komponentlar | Ovoz balandligi |
| Shablon DNKa | ixtiyoriy |
| 10 mkM oldinga astar | 1 mkl |
| 10 mkM teskari astar | 1 mkl |
| dNTP aralashmasi (har biri 10 mM) | 1 mkl |
| 10 × Taq buferi | 5 mkl |
| Taq DNK polimerazab | 0,25 mkl |
| Nukleazsiz suv | 50 mL gacha |
Eslatmalar:
1) Turli shablonlarning optimal reaktsiya konsentratsiyasi har xil.Quyidagi jadvalda 50 µL reaksiya tizimining tavsiya etilgan shablonidan foydalanish ko‘rsatilgan.
| DNK | Miqdori |
| Genomik | 1 ng-1 mkg |
| Plazmid yoki virusli | 1 pg-1 ng |
2) Taq DNK polimerazasining optimal kontsentratsiyasi maxsus ilovalarda 0,25 µL~1 µL oralig‘ida bo‘lishi mumkin.
ReaktsiyaDastur
| Qadam | Harorat(°C) | Vaqt | Velosipedlar |
| Dastlabki denaturatsiyaa | 95 ℃ | 5 daqiqa | - |
| Denaturatsiya | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 tsikl |
| Yuvishb | 60 ℃ | 15 s | |
| Kengaytma | 72 ℃ | 1kb/daq | |
| Yakuniy kengaytma | 72 ℃ | 5 daqiqa | - |
Eslatmalar:
1) Boshlang'ich denaturatsiya holati ko'pchilik kuchaytirish reaktsiyalari uchun mos keladi va shablon tuzilishining murakkabligiga qarab o'zgartirilishi mumkin.Agar shablon tuzilishi murakkab bo'lsa, denaturatsiyadan oldingi vaqtni dastlabki denatürasyon effektini yaxshilash uchun 5-10 minutgacha uzaytirish mumkin.
2) Yuvish haroratini primerning Tm qiymatiga qarab sozlash kerak, bu odatda primerning Tm qiymatidan 3 ~ 5 ℃ pastroqqa o'rnatiladi;Murakkab shablonlar uchun samarali kuchaytirishga erishish uchun tavlanish haroratini sozlash va uzaytirish vaqtini uzaytirish kerak.
